熱塑充填時(shí)牙根面溫度變化及熱刺激對(duì)牙周膜細(xì)胞生物學(xué)特性影響的研究.pdf

1、現(xiàn)代根管治療理念要求根管徹底的消毒和嚴(yán)密的充填，與側(cè)方加壓充填技術(shù)相比，熱垂直加壓技術(shù)可以提供高密度的充填以及在根管口及根尖孔處良好的封閉性，尤其適用于形態(tài)復(fù)雜的根管，如不規(guī)則的狹部、側(cè)副根管、彎曲根管、根管內(nèi)吸收等。另外，作為牙膠的整體充填，避免了冷側(cè)壓充填容易出現(xiàn)的牙膠尖之間的空隙，并明顯降低了牙膠與根管壁之間的縫隙，降低微滲漏問(wèn)題[1,2]。然而，由于是熱牙膠加壓充填，在充填過(guò)程中由于加熱引起牙根表面溫度增加，從而有可能會(huì)對(duì)牙周組

2、織造成損傷，這一問(wèn)題始終是臨床研究的熱點(diǎn)。目前認(rèn)為：10℃閾值是衡量這種充填技術(shù)是否安全的主要標(biāo)準(zhǔn)，若牙根表面溫度升高超過(guò)10℃，則可能會(huì)對(duì)牙周組織造成不可逆性損傷[3]。
　　許多研究表明，在使用已經(jīng)商品化的根管充填設(shè)備以及溫度設(shè)置進(jìn)行根管充填時(shí)，可引起牙根表面溫度升高6.5-22.1℃[4,5]。說(shuō)明如果操作不當(dāng)，就可能會(huì)因?yàn)楦艹涮顣r(shí)牙根表面的溫度過(guò)高而損傷牙齒周圍組織。
　　牙周膜是致密的纖維結(jié)締組織，用以連接牙骨質(zhì)

3、和牙槽骨，將牙齒“懸吊”于牙槽窩中，牙根表面的溫度會(huì)直接傳遞給牙周膜，當(dāng)牙周膜細(xì)胞受到熱刺激后，細(xì)胞會(huì)發(fā)生一系列的胞內(nèi)活動(dòng)，應(yīng)對(duì)熱刺激等不良的應(yīng)激刺激。然而熱刺激對(duì)正常牙周膜細(xì)胞和炎癥牙周膜細(xì)胞的生物學(xué)特性有何影響，相關(guān)的研究較少。我們之前有研究顯示，牙周膜細(xì)胞中存在著炎癥體（inflammasomes）以及炎癥體通路，我們推測(cè)，熱刺激時(shí)，牙周膜細(xì)胞的炎癥體信號(hào)系統(tǒng)會(huì)出現(xiàn)相應(yīng)的變化，然而這種變化是否會(huì)加劇患牙牙周炎的發(fā)展？是一過(guò)性的還是

4、不可逆的？細(xì)胞內(nèi)免疫系統(tǒng)的炎癥體調(diào)控機(jī)制是如何進(jìn)行的？這些都值得我們進(jìn)一步探討，以期根據(jù)臨床現(xiàn)象為基礎(chǔ)，從細(xì)胞學(xué)層面上為臨床熱塑牙膠充填系統(tǒng)的選擇以及溫度的控制提供參考。
　　本實(shí)驗(yàn)共分三部分：
　　實(shí)驗(yàn)一：B&L熱塑系統(tǒng)充填時(shí)牙根表面溫度測(cè)定分析
　　收集獲得117顆單根直根管離體牙，符合納入條件60顆離體牙。分別在釉牙骨質(zhì)界處水平截除牙冠，疏通預(yù)備根管，藻酸鹽印模材料均勻包繞各牙根，分別在冠部、根中部、根尖上4mm

5、位置留一檢測(cè)孔，用以放置熱電偶金屬感應(yīng)端。B&L熱塑系統(tǒng)分別設(shè)置230℃、200℃、180℃溫度根管充填。檢測(cè)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，根管充填時(shí)，三測(cè)量點(diǎn)牙根表面溫度均升高，其中230℃充填時(shí)冠部、根中部、根尖上4mm位置表面溫度平均升高值分別為：12.84℃、9.68℃、7.28℃；200℃充填時(shí)分別為10.37℃、8.76℃、6.67℃；180℃充填時(shí)分別為：9.42℃、8.63℃、6.61℃。不同充填溫度導(dǎo)致牙根表面的溫度升高值之間有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異

6、（P＜0.05）。同一充填溫度牙根表面三個(gè)測(cè)量點(diǎn)溫度升高值之間有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.05）。結(jié)果提示，230℃、200℃充填時(shí)，在冠部牙根表面溫度平均值升高超過(guò)10℃，應(yīng)引起臨床操作者注意。
　　實(shí)驗(yàn)二：不同根管壁厚度在進(jìn)行充填時(shí)牙根表面溫度變化的差異分析
　　60顆牙齒根管充填完成后，在上述三個(gè)監(jiān)測(cè)點(diǎn)處截開牙根，測(cè)得根管壁厚度，并分組為1.0mm組（0.8~1.2mm）、1.5mm組（1.3~1.7mm）、2.0mm組（1

7、.8~2.3mm）。分析不同充填溫度、不同監(jiān)測(cè)點(diǎn)和不同根管壁厚度的溫度變化。結(jié)果顯示，冠部根管壁厚度1.0mm組、1.5mm組和2.0mm組在230℃充填時(shí)牙根表面溫度平均升高值分別為：13.74℃、12.25℃、10.23℃，200℃充填時(shí)分別為：10.77℃、9.98℃、8.73℃，180℃充填時(shí)分別為：9.86℃、9.08℃、8.57℃。冠部根管壁1.0mm組與2.0mm組厚度牙根表面溫度升高值之間具有顯著差異（P＜0.05）。隨

8、著根管壁增厚，溫度升高值降低。由此可看出，冠部根管壁厚度1.0mm組，230℃、200℃充填時(shí)，牙根表面溫度升高超過(guò)10℃。因此建議對(duì)于根管壁較薄的牙齒，更應(yīng)適當(dāng)降低充填溫度，避免對(duì)牙周組織造成不可逆性損傷。
　　實(shí)驗(yàn)三：熱刺激對(duì)正常和炎癥牙周膜細(xì)胞生物學(xué)特性影響的初步探究
　　本實(shí)驗(yàn)使用LPS和ATP刺激牙周膜細(xì)胞（PDLCs）來(lái)模擬炎癥環(huán)境。取37℃培養(yǎng)第3~5代的人正常牙周膜細(xì)胞，分為八組：正常對(duì)照組、ATP刺激組、L

9、PS刺激組、ATP+LPS刺激組、正常+熱刺激、ATP+熱刺激、LPS+熱刺激、ATP+LPS+熱刺激。5mmol/L ATP預(yù)刺激2小時(shí)后，加入終末濃度10ug/ml LPS刺激6小時(shí)，然后放入45℃孵箱中熱刺激2小時(shí)。正常和炎癥牙周膜細(xì)胞置于37℃和45℃孵箱中培養(yǎng)，測(cè)得6小時(shí)細(xì)胞活性曲線。結(jié)果顯示，正常牙周膜細(xì)胞第2個(gè)小時(shí)開始，細(xì)胞生長(zhǎng)活性明顯降低；炎癥牙周膜細(xì)胞第1小時(shí)細(xì)胞活性明顯降低，第2小時(shí)細(xì)胞活性降至50％左右。ATP和L

10、PS共同刺激后，qRT-PCR檢測(cè)牙周膜細(xì)胞中NLRP3、caspase-1 mRNA及其相關(guān)炎性因子IL-1β、IL-18 mRNA表達(dá)量均呈現(xiàn)明顯升高。熱刺激2小時(shí)后，HSR-1和HSF-1mRNA表達(dá)量升高，四種炎癥因子表達(dá)量均降低。表明炎癥狀態(tài)下，熱刺激可能抑制牙周膜細(xì)胞NLRP3的活性，引起 Caspase-1、IL-1β以及 IL-18 mRNA表達(dá)量下調(diào)。提示熱休克反應(yīng)有可能負(fù)反饋調(diào)節(jié)著NLRP3/ Caspase-1炎癥

11、體通路，炎癥牙周膜細(xì)胞抵抗熱刺激的能力減弱。
　　結(jié)論：
　　1.在根管熱塑充填時(shí)，牙根冠部溫度升高最為明顯，230℃和200℃充填時(shí)，牙根冠部溫度升高超過(guò)10℃。
　　2.根管壁的厚度是影響溫度傳導(dǎo)的主要因素，對(duì)于根管壁較薄的牙齒（如扁根管牙及內(nèi)吸收牙齒），200℃、230℃充填時(shí)，牙根表面溫度升高超過(guò)10℃，有可能會(huì)對(duì)牙周組織造成不可逆性損傷。
　　3.熱休克反應(yīng)可能負(fù)反饋調(diào)節(jié)NLRP3/Caspase-1炎