多頭絨泡菌PSR蛋白的研究.pdf

1、SR蛋白(Serine/Arginine-rich protein)是一組結(jié)構(gòu)相關(guān)、進(jìn)化保守的non-snRNP剪接因子，在調(diào)節(jié)剪接復(fù)合體組裝和調(diào)節(jié)pre-mRNA組成型剪接和選擇型剪接方面發(fā)揮重要作用。多頭絨泡菌(Physarum polycephalum)是原核生物與真核生物之間的過渡態(tài)真核古生物，但尚未見到多頭絨泡菌SR蛋白的研究報(bào)道。
　　本文從多頭絨泡菌分離到一個(gè)SR類似蛋白cNDA，其編碼蛋白的C-端含有一個(gè)富含精氨酸

2、/絲氨酸二肽序列(Arginine/Serine motif)的結(jié)構(gòu)域(RS domian)，RS domain的N-端毗鄰一個(gè)SR蛋白激酶錨定結(jié)構(gòu)域(Docking motif)，與其它物種SR蛋白的C-端結(jié)構(gòu)類似，故將該蛋白命名為PSR(Physarum SR)。本文以[γ-32p] ATP為底物，通過放射自顯影檢測(cè)了大腸桿菌(E.Coli)表達(dá)的多頭絨泡菌SR蛋白激酶PSRPK(Physarum Serine/Arginine P

3、rotein-specific Kinase)對(duì)大腸桿菌表達(dá)的PSR及其殘缺肽和突變肽的磷酸化作用，發(fā)現(xiàn)PSRPK能在體外磷酸化PSR以及擁有完整RS domain和Docking motif的PSR殘缺肽。研究還發(fā)現(xiàn)，PSRPK磷酸化作用位點(diǎn)位于PSR C-端連續(xù)的RS二肽重復(fù)序列(5×RS)上，Docking motif在調(diào)節(jié)PSRPK磷酸化PSR上扮演重要角色，PSRPK的ATP結(jié)合區(qū)(ATP-binding region, AB

4、R)序列62LGWGHFSTVWLAIDEKNGGREVALK86和絲氨酸/蘇氨酸激酶活性位點(diǎn)特征序列(serine/threonine protein kinases activesite signature，AS)184IIHTDLKPENVLL196是影響PSRPK磷酸化PSR的關(guān)鍵序列，Lys86和Asp188分別是ABR和AS序列的關(guān)鍵氨基酸。
　　進(jìn)化保守的14-3-3蛋白廣泛參與細(xì)胞的各種生命活動(dòng)。已有的研究顯示，植

5、物14-3-3蛋白在調(diào)節(jié)SR蛋白SRp38應(yīng)答熱脅迫時(shí)扮演著重要角色。P14-3-3是多頭絨泡菌14-3-3類似蛋白。PSR是以P14-3-3為餌蛋白分離的。本文通過FRET檢測(cè)了PSR與P14-3-3在哺乳動(dòng)物細(xì)胞內(nèi)的相互作用，發(fā)現(xiàn)PSR在細(xì)胞內(nèi)的分布受P14-3-3的調(diào)節(jié)，與P14-3-3共表達(dá)的PSR由聚集在細(xì)胞核轉(zhuǎn)變?yōu)橹饕植荚诩?xì)胞質(zhì)。酵母雙雜交檢測(cè)結(jié)果顯示，PSR需要保持其C-端的完整Dockingmotif和連續(xù)的RS重復(fù)序