鈉氫交換體NHE1在高鹽誘導血管平滑肌細胞增殖和鈣離子調控中的作用.pdf

1、目的：本課題旨在觀察鈉氫交換體(Na+/H+ exchanger, NHE1)在高鹽誘導的血管平滑肌細胞增殖中的表達，并初步探討其在高鹽誘導的血管平滑肌細胞增殖中作用。
　　方法：（1）鹽濃度、NHE1阻斷劑（Amiloride）濃度及作用時間的確定:取大鼠腹主動脈采用組織塊貼壁法培養(yǎng)大鼠血管平滑肌細胞（VSMC），實驗分為對照組(Na+濃度139mmol/L)，高鹽組(Na+濃度159mmol/L)，高鹽+阻斷劑組（ Na+濃度

2、159mmol/l+Amiloride濃度10μM、20μM、30μM、40μM）。利用MTT比色法檢測不同濃度的Amiloride對高鹽干預的VSMCs增殖的影響，以確定Amiloride的最佳干預濃度。（2）效應和機制分析:VSMCs無血清同步化24h后，實驗分為對照組(Na+濃度139mmol/L)，對照+阻斷劑組(Na+濃度139mmol/L+Amiloride濃度30μM)，高鹽組(Na+濃度159mmol/L)，高鹽+阻斷劑

3、組（Na+濃度159mmol/l+Amiloride濃度30μM）繼續(xù)培養(yǎng)72h后進行以下實驗：超微量Ca2+-ATPase測試試劑盒測定細胞膜鈣泵活性；細胞免疫熒光、real-time PCR及Western Blot檢測大鼠VSMC中NHE1、NCX-1、PMCA4基因與蛋白表達，應用比率熒光法檢測各組VSMC內鈣離子的濃度及細胞內pH值。
　　結果：MTT法顯示高鹽+阻斷劑組（Amiloride濃度為30μM）增殖能力較高鹽

4、組明顯減弱。與對照組比較，高鹽組NHE1、NCX-1、PCNA蛋白表達增加，PMCA4蛋白表達降低，細胞內鈣離子濃度及 pH值明顯增加，（P﹤0.05）。同時，NHE1、NCX-1 mRNA表達增加（P﹤0.05），PMCA4 mRNA表達無明顯差別（P﹥0.05）；與高鹽組相比，高鹽+阻斷劑組NHE1、NCX-1、PCNA蛋白以及NHE1、NCX-1 mRNA表達下調（P﹤0.05），PMCA4蛋白和mRNA表達無明顯差別（P﹥0.0