丹參調(diào)節(jié)AQP1效應(yīng)與其改善微循環(huán)障礙（水瘀）的關(guān)系研究.pdf

1、研究背景：
　　血瘀即是離經(jīng)之血未能及時(shí)排出或消散，停留于體內(nèi)；或血液運(yùn)行不暢，積于臟腑、器官、組織之內(nèi)，失去正常生理功能而產(chǎn)生的證候，即為血瘀證。
　　傳統(tǒng)中醫(yī)理論認(rèn)為血瘀的產(chǎn)生與血與脈兩個(gè)因素密切相關(guān)。一、血液滋潤(rùn)與濡養(yǎng)功能的發(fā)揮易受到寒、熱、氣滯、氣虛等因素的影響，故《靈樞本藏》有“血和則經(jīng)脈流行”的論述。此外傳統(tǒng)中醫(yī)尚有“津血同源”“汗血同源”“精血同源”等觀點(diǎn)，認(rèn)為汗液、津精液等可以互化互生。因此我們認(rèn)為血瘀在一定

2、程度上伴有水液停聚。二、“脈者，血之府”《素問脈要精微論》，脈既是血液化生的場(chǎng)所，又是血液運(yùn)行的通道，因此脈道通利與否是血液能否暢通的前提和保證。
　　現(xiàn)代研究證實(shí)微循環(huán)障礙有微血流異常（血），可改變微血流狀態(tài)，使血液“粘稠”，而呈現(xiàn)血瘀的病理表現(xiàn)；其次存在微血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷（脈），血管內(nèi)皮細(xì)胞（Vascular endothelial cell，VEC）是組織半透膜、襯貼于血管內(nèi)側(cè)面，屬“脈”重要組成、與血緊密接觸，對(duì)內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定

3、、組織血供與代謝調(diào)控非常重要。血管內(nèi)皮細(xì)胞的損傷可以導(dǎo)致血管通透性改變，使血漿蛋白滲入組織間隙，組織液膠體滲透壓升高，造成“水積”，即血瘀兼“水積”象，這與中醫(yī)的“津血同源”“汗血同源”“精血同源”觀點(diǎn)不謀而合。而以往治療血瘀證多注重于血而忽視脈道損傷導(dǎo)致的水積，故本課題提出“水瘀”概念，創(chuàng)建“活血利水”法，并將其分為“活血消腫”和“活血利尿”兩個(gè)方面在肺、腎組織體現(xiàn)。在《素問?調(diào)經(jīng)論篇》“病在脈、調(diào)之血，病在血、調(diào)之絡(luò)”理論指導(dǎo)下，將

4、VEC作為改善微循環(huán)障礙的效應(yīng)位點(diǎn)。
　　水通道（Aquaporin，AQP）是一種與水通透性（吸收、分泌、轉(zhuǎn)運(yùn)）有關(guān)的細(xì)胞膜糖蛋白，維持細(xì)胞內(nèi)外水平衡，AQP1選擇性分布于內(nèi)皮細(xì)胞（VEC）、上皮細(xì)胞等，在肺、腎組織均有表達(dá)。實(shí)驗(yàn)證實(shí) AQP1在血管生成和細(xì)胞遷移中發(fā)揮重要作用，AQP1有助于VEC修復(fù)。故AQP1可以作為“活血利水”法辨治微循環(huán)障礙的新指標(biāo)。
　　丹參作為傳統(tǒng)的活血藥，本文冀以探討丹參是否可通過保護(hù)VEC

5、以改善微循環(huán)障礙以及對(duì)AQP1的調(diào)節(jié)效應(yīng)的關(guān)系進(jìn)行研究。
　　第一部分：丹參對(duì)急性微循環(huán)障礙大鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞的保護(hù)作用
　　目的：1、驗(yàn)證鹽酸腎上腺素及冰水刺激造成急性微循環(huán)障礙大鼠即血瘀證模型造模成功。
　　2、觀察血瘀證相關(guān)參數(shù)變化，驗(yàn)證丹參通過保護(hù)內(nèi)皮細(xì)胞以改善微循環(huán)障礙。
　　方法：50只SD雄大鼠隨機(jī)分為兩組，正常組10只，模型組40只，模型組采用腹部皮下注射鹽酸腎上腺素和冰水泳刺激。造模成功的再分為：

6、正常組、模型組、西藥對(duì)照組、丹參低劑量、丹參中劑量組、丹參高劑量組。觀察各組大鼠精神、毛發(fā)、舌質(zhì)顏色等基本狀態(tài)，剃耳部毛在微循環(huán)儀器檢測(cè)耳部微小血管血液循環(huán)狀態(tài)及檢測(cè)血液粘度和紅細(xì)胞變形能力確認(rèn)微循環(huán)障礙即血瘀證模型造模成功；ELISA法檢測(cè)大鼠血清中血管內(nèi)皮素（ET-1）、P-選擇素（P-Selection）、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF）含量。
　　結(jié)果：丹參可以明顯改善大鼠耳部微循環(huán)障礙并降低大鼠血液粘度；丹參顯著減少ET-1

7、、P-Selection、VEGF的含量。
　　結(jié)論：丹參可以改善大鼠微循環(huán)障礙其機(jī)制與通過改善內(nèi)皮細(xì)胞結(jié)構(gòu)或者功能有關(guān)，并驗(yàn)證血管內(nèi)皮細(xì)胞為血瘀證的效應(yīng)位點(diǎn)。
　　第二部分：丹參改善急性微循環(huán)障礙大鼠肺損傷及對(duì)肺組織AQP1調(diào)節(jié)作用
　　目的：通過丹參對(duì)于微循環(huán)障礙大鼠肺組織損傷的改善及對(duì) AQP1表達(dá)的調(diào)節(jié)，驗(yàn)證丹參通過上調(diào)肺組織內(nèi)皮細(xì)胞上 AQP1的表達(dá)來減輕微循環(huán)障礙大鼠肺組織損傷及肺水腫。
　　方法：取

8、大鼠肺組織進(jìn)行肺水腫參數(shù)的檢測(cè)，肺濕/干比(W/D)和右肺/體重之比(R/B)；HE染色法觀察各組肺組織病理形態(tài)學(xué)變化；用Western blot檢測(cè)方法分析各組大鼠肺組織 AQP1的表達(dá)；運(yùn)用免疫組織化學(xué)檢測(cè)方法檢測(cè)各組大鼠肺組織的AQP1表達(dá)。
　　結(jié)果：肺濕/干比及右肺/體重之比提示：和正常組相比，模型組均顯著升高(P<0.05)丹參中劑量、丹參高劑量和模型組相比均降低(P<0.05)；HE染色結(jié)果：模型組具有急性肺組織損傷

9、的表現(xiàn)，丹參具有明顯的改善作用且隨著劑量的增加肺組織結(jié)構(gòu)越趨于正常；AQP1表達(dá)：在肺組織中，丹參低、中、高劑量組較模型組表達(dá)量均升高，且隨著丹參劑量增高表達(dá)量增加明顯。
　　結(jié)論：丹參通過上調(diào)肺組織 AQP1的表達(dá)來減輕微循環(huán)障礙大鼠急性肺組織損傷及肺水腫，并驗(yàn)證“血瘀證”亞型“水瘀”存在假說。
　　第三部分：丹參改善急性微循環(huán)障礙大鼠腎損傷及對(duì)腎組織AQP1調(diào)節(jié)作用
　　目的：通過丹參對(duì)微循環(huán)障礙大鼠腎組織損傷的改

10、善及對(duì)AQP1表達(dá)的調(diào)節(jié)，驗(yàn)證丹參通過上調(diào)AQP1表達(dá)改善微循環(huán)障礙大鼠腎損傷所致的水液代謝障礙。
　　方法：HE染色法觀察各組腎組織病理形態(tài)學(xué)變化；用Western blot檢測(cè)方法分析各組大鼠腎組織AQP1的表達(dá)；運(yùn)用免疫組織化學(xué)檢測(cè)方法檢測(cè)各組大鼠腎組織的AQP1表達(dá)。
　　結(jié)果：HE染色結(jié)果：模型組具有腎損傷的表現(xiàn)，丹參具有明顯的改善作用且隨著劑量的增加腎組織結(jié)構(gòu)及功能越趨于正常；AQP1表達(dá)：在腎組織中，丹參低、中

11、、高劑量組較模型組表達(dá)量均升高，且隨著丹參劑量增高表達(dá)量增加明顯。
　　結(jié)論：丹參改善微循環(huán)障礙大鼠腎損傷所致的水液代謝障礙與通過上調(diào) AQP1表達(dá)有關(guān)，體現(xiàn)“活血利水”法在“水瘀”病癥治療中的重要性。
　　小結(jié)：
　　1、證實(shí)鹽酸腎上腺素及冰水泳刺激大鼠血瘀證模型有微循環(huán)障礙表現(xiàn)。
　　2、丹參通過降低血清 ET-1、P-selection、VEGF含量保護(hù)血管內(nèi)皮細(xì)胞以改善微循環(huán)障礙，并驗(yàn)證血管內(nèi)皮細(xì)胞為血瘀