重組免疫融合肽Tα1-BP5對(duì)鴨坦布蘇病毒滅活疫苗的免疫增強(qiáng)作用.pdf

1、鴨坦布蘇病毒（Duck tembusu virus, DTMUV）是一種新型黃病毒。該病毒感染鴨后以產(chǎn)蛋量急劇降低為主要特征，發(fā)病范圍廣、傳播迅速，發(fā)病前期為長(zhǎng)時(shí)間的高度發(fā)熱，發(fā)病后期會(huì)出現(xiàn)一定比例的神經(jīng)癥狀，主要表現(xiàn)為站立不穩(wěn)、癱軟及運(yùn)動(dòng)失調(diào)等，有些甚至在數(shù)日內(nèi)迅速死亡。目前，關(guān)于該病的預(yù)防措施主要通過鴨坦布蘇病毒滅活疫苗進(jìn)行免疫接種，但滅活疫苗的免疫效果仍需進(jìn)一步完善，該病的防控仍需加強(qiáng)。本研究通過噬菌體展示技術(shù)以 DTMUV HN

2、1株 E蛋白作為標(biāo)靶篩選出2條能與DTMUV HN1株E蛋白特異性結(jié)合的多肽，并檢測(cè)了其對(duì) DTMUV的抑制作用；同時(shí)利用基因工程技術(shù)制備了重組融合肽 Tα1-BP5（rTα1-BP5），初步檢測(cè)了該融合肽的免疫增強(qiáng)作用；最后以 rTα1-BP5配合鴨坦布蘇病毒滅活疫苗免疫雛鴨，對(duì)免疫后雛鴨的免疫效力進(jìn)行分析，以期為鴨坦布蘇病毒病的防控奠定基礎(chǔ)。試驗(yàn)主要內(nèi)容分為以下三個(gè)方面：
　　1．DTMUV HN1株囊膜E蛋白抑制肽的篩選及鑒

3、定
　　利用噬菌體展示技術(shù)將DTMUV HN1株E蛋白作為靶標(biāo)，篩選出2條能與DTMUV HN1株 E蛋白特異性結(jié)合的多肽 P3-12：HWSTRQGSTRWN和 P8-12：THRSWQGNSWYM，然后分析E蛋白結(jié)合肽P3-12和P8-12對(duì)DTMUV在鴨胚成纖維細(xì)胞增殖方面的影響，結(jié)果顯示， E蛋白抑制肽 P3-12和 P8-12本身對(duì)鴨胚成纖維細(xì)胞的增殖無(wú)明顯影響，不同濃度的的抑制肽P3-12和P8-12均能顯著降低 DT

4、MUV在鴨胚成纖維細(xì)胞中的病毒滴度和病毒拷貝數(shù)。本試驗(yàn)為進(jìn)一步探明鴨坦布蘇病毒與宿主的相互作用及抗病毒制劑的開發(fā)提供依據(jù)。
　　2．rTα1-BP5的構(gòu)建表達(dá)及其佐劑特性檢測(cè)
　　通過基因工程技術(shù)表達(dá) rTα1-BP5，并采用 MTT法檢測(cè)其表達(dá)產(chǎn)物的體外活性。將 rTα1-BP5與 H9N2型 AIV滅活疫苗聯(lián)合免疫，并設(shè)立4個(gè)試驗(yàn)組與PBS對(duì)照組。分別測(cè)定不同組中小鼠禽流感(Avian influenza virus，A

5、IV)不同時(shí)期HI抗體效價(jià)、H9N2型AIV抗體亞型含量、血清中IL-4和IFN-γ的含量和動(dòng)物攻毒試驗(yàn)，結(jié)果顯示，滅活疫苗+rTα1-BP5組的HI抗體效價(jià)與IgG1和IgG2a的抗體含量與血清中 IL-4和 IFN-γ均高于其他組差異顯著，在攻毒后滅活疫苗+rTα1-BP5組小鼠肺臟中病毒滴度明顯下降且與其他組相比差異極顯著，并且在第7 d在小鼠的肺臟中幾乎檢測(cè)不到病毒滴度。說明 rTα1-BP5具有良好的免疫佐劑的潛能，本研究為新

6、型疫苗佐劑的研究開發(fā)奠定了基礎(chǔ)。
　　3．rTα1-BP5對(duì)鴨坦布蘇病毒滅活疫苗免疫效果增強(qiáng)作用
　　將重組融合肽 Tα1-BP5配合鴨坦布蘇病毒滅活疫苗免疫雛鴨，通過檢測(cè)鴨
　　體內(nèi)血清IgG抗體、血清細(xì)胞因子水平、動(dòng)物攻毒保護(hù)試驗(yàn)及HE染色來評(píng)價(jià)重組融合肽 Tα1-BP5對(duì)鴨坦布蘇病毒滅活疫苗的免疫增強(qiáng)作用。結(jié)果顯示，疫苗組雛鴨血清 IgG抗體、細(xì)胞因子（IL-4、IFN-γ）水平均顯著高于對(duì)照組與單純疫苗組。動(dòng)物