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1、目的:本論文以人肺表面活性蛋白A(SP-A)為靶點(diǎn),制備針對(duì)人肺SP-A的納米抗體,為后期臨床帶藥提供理想的靶向配體。
方法:1.人肺泡表面活性蛋白A(hSP-A)的獲取及鑒定:從新鮮人肺組織中利用動(dòng)物蛋白提取液提取的人肺組織總蛋白,Western blot、ELISA驗(yàn)證蛋白特異性。
2.人肺組織SP-A特異性納米抗體(hSPA-Nb)的篩選:用固相法對(duì)噬菌體納米抗體庫(kù)進(jìn)行三輪淘篩,獲得富集的三級(jí)篩選抗體庫(kù),并采用
2、間接phage-ELISA從三級(jí)抗體庫(kù)中挑出高特異性基因序列。
3.特異性hSPA-Nb的表達(dá)與純化:測(cè)序分析陽(yáng)性菌株并構(gòu)建重組質(zhì)粒PET-26b(+)/Nb4-VHH,進(jìn)一步表達(dá)純化。
4.hSPA-Nb4的肺靶向性及安全性檢測(cè):用Western Blot、ElISA檢測(cè)蛋白特異性,細(xì)胞熒光實(shí)驗(yàn),免疫組化及小鼠活體內(nèi)成像中肺靶向性和安全性。
結(jié)果:本研究首次成功制備出與人肺組織hSP-A存在特異性結(jié)合的抗
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