橘皮湯有效部位制劑開發(fā)及其主要成分藥物動力學研究.pdf

1、目的:
　　橘皮湯是《金匱要略》中的經(jīng)典方劑，由橘皮和生姜兩味中藥按1∶2比例組成，實際應用中常以干姜代替生姜。目前橘皮湯的臨床應用多以該方為基礎(chǔ)加減以湯劑應用，市場上尚未見以該方為基礎(chǔ)的中成藥或保健食品上市，因此未能最大程度發(fā)揮該方劑的功用。另外對于該方劑的現(xiàn)代藥理研究也有待加強。在大量前期實驗研究的基礎(chǔ)上，我們對橘皮湯（陳皮和干姜）進行二次開發(fā)，與現(xiàn)代制劑工藝相結(jié)合，研制出具有抗疲勞、抗氧化及改善心血管功能等多種作用的制劑-陳

2、皮姜軟膠囊。同時對陳皮和干姜的主要成分6-姜酚、橙皮苷、川陳皮素等進行藥代動力學研究，闡明其體內(nèi)血藥濃度變化及相關(guān)藥動參數(shù)，同時研究對相關(guān)代謝酶的影響及藥物間相互作用。為橘皮湯的開發(fā)及其臨床合理應用提供實驗依據(jù)。
　　方法:
　　陳皮和干姜有效部位提取工藝研究:
　　(1)陳皮揮發(fā)油提取工藝研究。根據(jù)影響揮發(fā)油提取的因素，選取浸泡時間、提取時間、加水量作為考察因素，以揮發(fā)油得率為考察指標，采用正交實驗設(shè)計法篩選最佳工藝

3、參數(shù)。
　　(2)干姜超臨界萃取工藝研究。采用單因素考察結(jié)合均勻設(shè)計法對影響超臨界提取的主要因素如萃取壓力、萃取溫度、解析壓力、解析溫度等進行考察，以萃取率為指標，篩選最佳工藝條件。
　　陳皮姜軟膠囊制備及質(zhì)量控制研究:陳皮姜軟膠囊的制備;采用薄層色譜法建立制劑中干姜藥材的鑒別方法，采用高效液相色譜法建立制劑中6-姜酚的含量測定方法。
　　陳皮姜軟膠囊體內(nèi)外抗氧化功能實驗研究:采用紫外分光光度法，測定不同濃度的供試品對

4、1，1-二苯基-2-苦肼基自由基(DPPH)清除能力，評價其體外抗氧化效果;將老齡小鼠按丙二醛(MDA)水平分為老齡對照組和低、中、高三個劑量組。連續(xù)灌胃15、30天后，分別測定血清MDA含量、超氧化物歧化酶(SOD)活力和谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-PX)活力。
　　采用高效液相色譜法測定陳皮（橙皮苷和川陳皮素）和干姜（6-姜酚）主要成分在大鼠體內(nèi)的血藥濃度，并研究其藥物動力學。
　　橙皮苷、川陳皮素和6-姜酚間的藥物相互

5、作用研究:使用人肝微粒體（HLM，混合組分）和特異性抑制劑對橙皮苷、川陳皮素、6姜酚的一相轉(zhuǎn)化途徑進行考察，推斷何種代謝酶參與了轉(zhuǎn)化途徑;使用人肝微粒體和探針底物考察橙皮苷、川陳皮素、6-姜酚對各細胞色素氧化酶(CYP)的抑制作用。
　　結(jié)果:
　　陳皮揮發(fā)油最佳提取工藝條件為:浸泡時間2小時、提取時間10小時、加水量10倍量;干姜超臨界精油最佳萃取工藝條件為:藥材粒度30目，萃取壓力28Mpa，萃取溫度48℃，解析Ⅰ壓力6

6、Mpa，解析溫度Ⅰ35℃，解析Ⅱ壓力6Mpa，解析溫度Ⅱ30℃，萃取時間3h。
　　陳皮姜軟膠囊的研制:根據(jù)藥典中藥材的最大用量及有效部位的最佳配比，按照壓制0.4g/粒軟膠囊的要求，確定輔料大豆油的用量，將原輔料混合均勻后，壓制了1萬粒陳皮姜軟膠囊;成品中干姜藥材鑒別的供試品色譜中，在與干姜對照藥材和6-姜酚對照品色譜相應的位置上顯相同斑點;根據(jù)高效液相色譜法測定成品中6-姜酚的含量為3.58％（14.31 mg/粒）。

7、　　陳皮姜軟膠囊體外抗氧化實驗顯示，其對DPPH的半數(shù)清除率IC50為0.55mg/mL;體內(nèi)實驗老齡小鼠給藥15天后中、高劑量組對MDA含量與對照組比較明顯降低，SOD和GSH-PX活性明顯升高，低劑量給藥組的抗氧化作用不明顯;給藥30天后各劑量組對MDA含量與對照組比較明顯降低，SOD和GSH-PX活性明顯升高，抗氧化作用明顯。
　　建立了高效液相色譜法測定大鼠血漿中橙皮苷、川陳皮素和6-姜酚的方法，方法學考察均符合生物樣品分

8、析的要求。橙皮苷、川陳皮素和6-姜酚的半衰期t1/2(β）值分別是11.55±2.11，15.07±2.94，15.40±2.14;最大濃度Cmax值是:1.88±0.37，2.55±0.42，0.98±0.26;藥時曲線下面積(AUC)0→∞值是:16.59±2.20，16.90±3.91，3.56±0.96。
　　橙皮苷在人肝微粒體反應體系中孵育時沒有表現(xiàn)出明顯的代謝趨勢，表明橙皮苷在人體內(nèi)的代謝不是由CYP或黃素單加氧酶(F

9、MO)等需要煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)輔酶的代謝酶介導。而川陳皮素和6-姜酚則在肝微粒體反應體系中顯示能很快被代謝。川陳皮素對CYP1A2有較強的抑制作用(IC50=3.1μM)，而6-姜酚對CYP2C19有較強抑制（IC50=9.9μM）。此外，川陳皮素對CYP2C8、CYP2C9和CYP2C19有一定的抑制作用，而6-姜酚對CYP1A2、CYP2E1和CYP3A4有一定的抑制作用。川陳皮素對6-姜酚的代謝有明顯的抑制作用

10、，而且該抑制作用為時間依賴性抑制(TDI)，高濃度(10μM)時可增加6-姜酚在人肝微粒體反應體系中孵育30分鐘后的剩余率6.4倍（從剩余14％到剩余93％），在低濃度(1μM)時，也可增加2.6倍（從剩余14％到剩余38％）。橙皮苷對6-姜酚的代謝及橙皮苷和6-姜酚對川陳皮素的代謝則影響不大。
　　結(jié)論:
　　本文所建立的干姜超臨界提取和陳皮揮發(fā)油提取的最佳工藝參數(shù)，經(jīng)中試放大實驗驗證，重現(xiàn)性良好，表明最佳工藝條件穩(wěn)定可行

11、。壓制的陳皮姜軟膠囊各項制劑指標均符合要求，所建立的薄層鑒別及含量測定方法準確、可靠、簡便，專屬性強，可有效控制產(chǎn)品的質(zhì)量。
　　本文中陳皮姜軟膠囊體外抗氧化實驗結(jié)果表明，其抗氧化效果較強。體內(nèi)實驗顯示其可以明顯降低老齡大鼠MDA含量，對SOD和GSH-PX活性均顯著上升。
　　本文所研究陳皮和干姜藥材中的主要成分橙皮苷、川陳皮素和6-姜酚對代謝酶的抑制作用及互相之間的代謝相互作用研究，發(fā)現(xiàn)川陳皮素對6-姜酚的代謝有明顯的抑