FBP1在增生性瘢痕中高表達(dá)并促進(jìn)成纖維細(xì)胞增殖和凋亡.pdf

1、目的:
　　增生性瘢痕是皮膚創(chuàng)傷愈合后的常見并發(fā)癥，多見于創(chuàng)傷和燒傷創(chuàng)面，成纖維細(xì)胞的大量增殖和細(xì)胞外基質(zhì)特別是膠原蛋白的異常沉積在增生性瘢痕的發(fā)生發(fā)展起重要作用。增生性瘢痕的不僅影響外觀，可能導(dǎo)致無(wú)汗、瘙癢、感覺(jué)異常等不適，甚至?xí)痍P(guān)節(jié)痙攣、肢體畸形，影響患者身心健康及社會(huì)功能。因此，如何抑制瘢痕的生長(zhǎng)、減少瘢痕的形成一直是臨床治療關(guān)注的重點(diǎn)。遺憾的是，迄今為止，對(duì)于增生性瘢痕的形成機(jī)制仍未明確，臨床上也缺乏確切的治療方法。<

2、br>　　近年來(lái)，隨著對(duì)病理性瘢痕機(jī)制研究的不斷深入，認(rèn)識(shí)到瘢痕的發(fā)生可能與原癌基因（如Bcl-2，Smad，c-myc）過(guò)表達(dá)使成纖維細(xì)胞增殖增多及抑癌基因（如p53，F(xiàn)as，RUNX3，p27）突變使成纖維細(xì)胞凋亡減少有關(guān)，使成纖維細(xì)胞數(shù)目增多，膠原蛋白分泌旺盛。原癌基因c-myc的表達(dá)與多種腫瘤發(fā)生發(fā)展有關(guān)，在調(diào)控細(xì)胞增殖分化起重要作用，在增殖期細(xì)胞中表達(dá)較高，在靜止期或分化期細(xì)胞中表達(dá)較低。FBP1是c-myc的一個(gè)遠(yuǎn)端上游元件

3、結(jié)合蛋白(the far upstream element binging protein1，F(xiàn)BP)，是DNA結(jié)合蛋白家族中的一員，參與調(diào)控c-myc在細(xì)胞中的表達(dá)。當(dāng)c-myc被廢除，遠(yuǎn)端的上游調(diào)控元件則不再受支持。相反，反FBP RNA中遠(yuǎn)端上游調(diào)控元件的單調(diào)性降低與內(nèi)源性c-myc基因表達(dá)的下調(diào)相關(guān)。研究表明適量的FBP有利于c-myc的表達(dá)，當(dāng)缺乏FBP時(shí)內(nèi)源性c-myc的表達(dá)不能被維持。
　　增生性瘢痕在組織學(xué)上表現(xiàn)為

4、成纖維細(xì)胞的大量增殖及細(xì)胞外基質(zhì)尤其是膠原蛋白的異常沉積，在一定程度上與腫瘤發(fā)生發(fā)展相似。已有研究表明原癌基因c-myc可促進(jìn)增生性瘢痕中成纖維細(xì)胞的增殖，而FBP1參與調(diào)控c-myc在細(xì)胞中的表達(dá)。既往對(duì)FBP1的研究主要集中在腫瘤組織中，發(fā)現(xiàn)FBP1在腫瘤組織中高表達(dá)，尚無(wú)相關(guān)研究探索FBP1在瘢痕組織中的表達(dá)情況。因此，本文探索FBP1在人增生性瘢痕中的表達(dá)及其對(duì)成纖維細(xì)胞增殖、凋亡及膠原表達(dá)方面的影響。
　　方法:

5、　　在無(wú)菌條件下收集新鮮的正常皮膚、增生性瘢痕及瘢痕疙瘩標(biāo)本，4℃保存，4小時(shí)內(nèi)送至實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。將同一份標(biāo)本分成三部分處理:一部分標(biāo)本固定后進(jìn)行石蠟包埋、切片，檢測(cè)正常皮膚和增生性瘢痕在組織學(xué)上的差異，檢測(cè)FBP1在正常皮膚和增生性瘢痕的表達(dá);一部分組織塊用于提取蛋白，檢測(cè)正常皮膚和增生性瘢痕中FBP1的表達(dá)差異;一部分組織用于成纖維細(xì)胞的原代培養(yǎng)及傳代，α-SMA免疫熒光鑒定增生性瘢痕成纖維細(xì)胞。取第2-6代增生性瘢痕成纖維細(xì)胞進(jìn)

6、行實(shí)驗(yàn)，將實(shí)驗(yàn)分為實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組，對(duì)實(shí)驗(yàn)組成纖維細(xì)胞加入siFBP1進(jìn)行轉(zhuǎn)染以降低成纖維細(xì)胞中FBP1的表達(dá)，對(duì)照組不加入siFBP1。收集實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組細(xì)胞，采用qRT-PCR法檢測(cè)siFBP1效用，MTT法檢測(cè)siFBP1對(duì)成纖維細(xì)胞的增殖能力的影響、流式細(xì)胞術(shù)（PI單染色法）檢測(cè)siFBP1對(duì)細(xì)胞周期的影響、TUNEL染色法檢測(cè)siFBP1對(duì)細(xì)胞凋亡的影響、Western Blotting檢測(cè)siFBP1對(duì)成纖維細(xì)胞蛋白表達(dá)的影響

7、。
　　結(jié)果:
　　FBP1在增生性瘢痕中表達(dá)高于正常皮膚，在增生性瘢痕來(lái)源的成纖維細(xì)胞中的表達(dá)也高于正常皮膚來(lái)源的成纖維細(xì)胞。siFBP1能有效降低增生性瘢痕中成纖維細(xì)胞中FBP1表達(dá)，抑制增生性瘢痕成纖維細(xì)胞增殖（P＜0.01），使細(xì)胞周期阻滯于S期(P＜0.01)。TUNEL染色未顯示siFBP1對(duì)成纖維細(xì)胞凋亡有明顯影響，但蛋白印跡結(jié)果顯示siFBP1減少增生性瘢痕成纖維細(xì)胞c-myc、collagenⅠ、colla