應(yīng)用RNAi技術(shù)阻抑CTGF對人增生性瘢痕成纖維細胞增殖和代謝的影響.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的：探討應(yīng)用RNA干擾(RNAi)抑制人增生性瘢痕成纖維細胞CTGF基因表達后，對成纖維細胞的增殖、凋亡、合成I型膠原蛋白(COL-I)及分泌纖維粘連蛋白(FN)的影響，從而為增生性瘢痕發(fā)生機制提供新的理論依據(jù)，為增生性瘢痕的治療提供新的靶點。
　　方法：1.設(shè)計針對人CTGF基因特異性的三條siRNA oligo，通過RT-PCR及Western blot檢測其在增生性瘢痕成纖維細胞中的干擾效果，從中篩選出一條最佳片段，并構(gòu)建

2、質(zhì)粒表達載體。2.重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染人增生性瘢痕成纖維細胞后，應(yīng)用CCK-8檢測成纖維細胞的增殖情況；流式細胞術(shù)檢測細胞的凋亡情況。3.重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染人增生性瘢痕成纖維細胞后，應(yīng)用RT-PCR、Western blot檢測轉(zhuǎn)染后成纖維細胞合成COL-I及FN的情況。
　　結(jié)果：1.設(shè)計的特異性基因序列干擾增生性瘢痕成纖維細胞后，分別在mRNA及蛋白水平檢測CTGF的表達，結(jié)果篩選出具有最佳抑制效應(yīng)的序列C3。2.成功構(gòu)建重組質(zhì)粒C3-sh

3、RNA。3.重組質(zhì)粒C3-shRNA轉(zhuǎn)染人增生性瘢痕成纖維細胞后，細胞凋亡率明顯增加(P<0.05)，細胞增殖率明顯降低(P<0.05)。4.重組質(zhì)粒C3-shRNA轉(zhuǎn)染人增生性瘢痕成纖維細胞可有效抑制成纖維細胞中COL-I和FN的表達。
　　結(jié)論：1.siRNACTGF作用于人增生性瘢痕成纖維細胞后能特異性地抑制CTGF的表達。2.下調(diào)CTGF基因表達可促進增生性瘢痕成纖維細胞的凋亡和抑制成纖維細胞的增殖，并能有效抑制增生性瘢痕

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