糖尿病心血管并發(fā)癥新機制及新型藥物治療研究.pdf

1、本文主要從以下幾方面進行論述：
　　第一部分 糖尿病動脈粥樣硬化新機制研究——PPARγ小泛素樣修飾介導糖尿病加速動脈粥樣硬化的新機制研究
　　目的：糖尿病(DM)可激活NF-KB下游炎癥反應，加速動脈粥樣硬化。過氧化物酶體增殖物激活受體γ(PPARγ)是一種廣泛表達的轉錄因子。新近的研究表明，PPARγ發(fā)生小泛素樣修飾后，能夠抑制NF-κB下游炎癥反應。Ubc9是PPARγ小泛素樣修飾的關鍵酶，在心肌、骨骼肌等組織中，DM

2、能下調Ubc9表達量，影響目標蛋白的小泛素樣修飾。然而，在血管組織和內皮細胞中，DM是否能通過下調Ubc9表達量并降低PPARγ小泛素樣修飾尚未明確。
　　方法:構建1型糖尿病和頸動脈球囊損傷大鼠模型，通過血管超聲和組織學檢測評價DM對血管的損傷。通過Wester Blot和免疫組化染色評價血管組織內Ubc9的表達情況，通過小泛素樣修飾試劑盒檢測PPARγ小泛素樣修飾程度。體外培養(yǎng)人臍靜脈內皮細胞(HUVEC)，通過不同時程不同濃

3、度的高糖刺激評價高糖對PPARγ小泛素樣修飾程度的影響，并用Real time-RT-PCR和Western Blot的方法檢測HUVEC炎癥基因表達量和Ubc9表達情況。在體內和體外通過過表達Ubc9或PPARγ受體激動劑羅格列酮提高PPARγ小泛素樣修飾程度，評價其是否對DM放大的血管損傷有保護作用。
　　結果:血管超聲和組織學分析表明DM大鼠血管損傷后內膜增殖程度較對照組顯著增加。同時，DM大鼠血管組織中Ubc9的表達量較對

4、照組大鼠出現(xiàn)顯著下調，PPARγ小泛素樣修飾程度明顯下降。體外培養(yǎng)HUVEC中，高糖培養(yǎng)造成炎癥基因IL-8，IL-1β表達量上升，同時造成Ubc9的表達量下調及PPARγ小泛素樣修飾程度明顯下降，并呈時間和糖濃度依賴性。在體內和體外分別采用過表達Ubc9或羅格列酮提高PPARγ小泛素樣修飾程度后，HUVEC炎癥基因表達較高糖培養(yǎng)組明顯回落，血管內膜增殖程度也出現(xiàn)顯著改善。
　　結論:本研究證實了高血糖對大鼠動脈組織和血管內皮細胞

5、中Ubc9表達量的下調作用以及對PPARγ小泛素樣修飾的抑制作用，進一步通過過表達Ubc9和使用PPARγ受體激動劑減緩了高血糖對血管的損傷，提示高血糖導致的Ubc9下調和PPARγ小泛素樣修飾程度下降是DM易化的動脈粥樣硬化的重要機制，并為DM動脈粥樣硬化的治療提供了新的線索。
　　第二部分 糖尿病心肌病新型藥物研究——齊墩果酸通過內皮素受體A拮抗作用在高糖導致的心肌損傷中發(fā)揮保護作用
　　目的:高糖刺激會導致內皮素-1(

6、ET-1)和及其受體表達量升高，這可能是加重糖尿病心血管并發(fā)癥的重要原因。齊墩果酸是一種在植物中廣泛存在的小分子化合物，前期研究證實其有潛在的內皮素受體A(ETA)拮抗作用。但齊墩果酸是否能在糖尿病造成的心肌損傷中發(fā)揮作用尚缺乏相關研究。
　　方法:利用大鼠乳鼠原代心肌細胞構建高糖損傷模型，利用Real time-RT-PCR和細胞免疫熒光染色分別檢測BNP在基因和蛋白水平的，通過TMRM染色評價線粒體膜電位和氧化應激反應，通過免

7、疫熒光染色測量心肌細胞面積，反映心肌細胞損傷狀態(tài)。通過計算機模擬ETA蛋白晶體結構和分子對接探索齊墩果酸與ETA發(fā)生相互作用的可能性，并利用人誘導多能干細胞(iPS)分化的心肌細胞和心肌細胞實時檢測系統(tǒng)驗證齊墩果酸對ET-1通路的抑制作用。
　　結果:高糖培養(yǎng)導致心肌細胞表面積增大，線粒體膜電位增加，BNP在基因水平和蛋白水平表達上調，同時導致ETA表達上調，且恢復低糖培養(yǎng)后心肌損傷和ETA上調均不能完全恢復，但ETA受體波生坦能

8、夠逆轉高糖造成的心肌損傷。齊墩果酸在分子對接試驗中能與ETA受體發(fā)生相互作用，且能改善ET-1導致的iPS心肌細胞搏動功能改變。齊墩果酸能夠有效緩解高糖造成的心肌細胞損傷。
　　結論:本研究證實，高糖能夠造成心肌細胞損傷，并產生代謝記憶效應，ETA在高糖刺激后的持續(xù)高表達可能是造成代謝記憶效應的重要原因。齊墩果酸是潛在的ETA受體拮抗劑，能夠在高血糖造成的心肌細胞損傷中發(fā)揮保護作用。
　　第三部分 光學相干斷層成像檢測冠狀動

9、脈支架植入術后支架絲周圍低密度區(qū)域的危險因素和預后分析。
　　目的:支架絲周圍低密度區(qū)域(PLIA)是PCI術后患者進行光學相干斷層成像(OCT)時呈現(xiàn)的一種圖像特征，既往認為與支架內膜修復狀態(tài)有關，但PLIA的臨床因素及其預后缺乏相關研究。本研究旨在探索PLIA的危險因素，并對其進行預后分析。
　　方法:連續(xù)入選PCI術后6個月以上接受OCT復查的患者，根據OCT圖像性質分為PLIA組和非PLIA組，比較兩組的臨床特征及與

10、其他OCT檢測所得圖像特征的關系，并進行二元Logistic回歸分析，分析PLIA的危險因素。對復查OCT后為進行PCI治療的患者進行預后觀察，評價PLIA患者的預后。
　　結果:共入選128例PCI術后OCT復查的患者，其中PLIA組22例(17.2％).PLIA的發(fā)生與甘油三酯(odds ratio[OR]:2.11，95％CI:1.14-3.90，P=0.017)，低密度脂蛋白(LDL,OR:2.61，95％CI:1.22-

11、5.66，P=0.015)，腦血管病史(OR:101.11，95％CI:6.54-1562.13，P＜0.001)和急性冠脈綜合征(ACS，OR:18.77，95％CI:2.73-128.83，P=0.003)呈正相關，與支架植入時間呈負相關(OR:0.57，95％CI:0.33-0.98，P=0.043)。共96名患者完成中位時間為3.8年的隨訪，7(7.3％)例患者發(fā)生主要心血管不良事件，與PLIA無顯著相關性。不穩(wěn)定心絞痛在PLI