布氏錐蟲蛋白Q38FZ4和Alba的結(jié)構(gòu)和功能研究.pdf

1、布氏錐蟲是一種原生寄生生物，通過采采蠅在哺乳動物間傳播，在撒哈拉以南的非洲地區(qū)引起人的嗜睡癥和牛的那加那病，對人的健康和經(jīng)濟發(fā)展帶來巨大危害，目前還沒有針對錐蟲病的有效藥物。本論文研究的主要對象是布氏錐蟲未知蛋白Q38FZ4和Alba，希望通過對它們結(jié)構(gòu)和功能的研究來為治療錐蟲病開辟新的道路。
　　Q38FZ4是布氏錐蟲中一個由85個氨基酸殘基構(gòu)成的可溶蛋白，對血液型和前循環(huán)型的錐體蟲都十分重要。Q38FZ4與哺乳動物中蛋白的序列

2、同源性非常低，而在動基體目寄生生物中該蛋白具有高度的保守性，是抗錐蟲藥物的潛在靶點。我們用核磁共振技術(shù)解析了Q38FZ4的溶液結(jié)構(gòu)，Q38FZ4蛋白具有一個由3個平行/反平行的β折疊片組成的β折疊片層，和1個斜跨該β片層的長螺旋以及分布在四周的4個小螺旋。我們通過RNA干擾對Q38FZ4進行敲除后，布氏錐蟲細胞的生長受到抑制，說明它對布氏錐蟲的生長十分重要。在熒光顯微鏡下，我們觀察到帶eYFP標簽的Q38FZ4蛋白僅在細胞分裂間期定位于

3、溶酶體上。在對帶不同標簽的Q38FZ4蛋白進行串聯(lián)親和純化實驗中，多種溶酶體蛋白和微管相關(guān)蛋白被分別純化出來，說明Q38FZ4參與溶酶體中的物質(zhì)運輸過程。
　　Alba家族蛋白是一類廣泛分布在古細菌和眾多真核生物中的以二聚體形式存在的核酸結(jié)合蛋白。這些蛋白能與核糖體亞基、翻譯因子、其他RNA結(jié)合蛋白相互作用，通過控制基因的表達來參與各種調(diào)節(jié)通路。布氏錐蟲中鑒定出了4種Alba蛋白，它們是TbAlba1-4。我們得到了TbAlba1

4、的晶體，并收集到了一套分辨率為2.7 A的衍射數(shù)據(jù)。我們通過GST pull down和ITC實驗確定了布氏錐蟲Alba蛋白間的相互作用及競爭結(jié)合關(guān)系。我們還發(fā)現(xiàn)TbAlba3和TbAlba4能結(jié)合布氏錐蟲中特定分子量大小的RNA，而TbAlba1和TbAlba2卻無法結(jié)合RNA，由此推測TbAlba3-4結(jié)合RNA的能力與它們C端的RGG重復序列有關(guān)。此外，它們在與TbAlba1或TbAlba2形成異二聚體后結(jié)合RNA的范圍得到提高。