釀酒酵母轉(zhuǎn)錄延伸因子Paf1復(fù)合物亞基Rtf1中HMD及Plus3結(jié)構(gòu)域及布氏錐蟲未知功能蛋白PDZ結(jié)構(gòu)域結(jié)構(gòu)的初步研究.pdf

1、蛋白質(zhì)是生命體的重要組成成分，是生命活動(dòng)最主要的實(shí)施者。蛋白質(zhì)的功能大多通過與配體如生物大分子的相互作用實(shí)現(xiàn)，某些結(jié)構(gòu)域在其中扮演關(guān)鍵角色。研究這些結(jié)構(gòu)域的結(jié)構(gòu)對(duì)于闡明其作用機(jī)制及進(jìn)一步揭示全蛋白的功能機(jī)制是必不可少的。在本課題中，我們選取了幾個(gè)參與重要蛋白與配體相互作用的結(jié)構(gòu)域，即釀酒酵母的Rtf1-Plus3、Rtf1-HMD及布氏錐蟲中一個(gè)未知功能蛋白的PDZ結(jié)構(gòu)域，對(duì)其結(jié)構(gòu)進(jìn)行了初步研究，以期解析高分辨結(jié)構(gòu)，為揭示其作用機(jī)制和在

2、全蛋白功能中扮演的角色打下基礎(chǔ)。
　　(Ⅰ) Rtf1是轉(zhuǎn)錄延伸因子Paf1C中的重要組成部分，通過自身的幾個(gè)獨(dú)立的功能結(jié)構(gòu)域經(jīng)由不同的途徑影響轉(zhuǎn)錄過程。目前Rtf1的具體功能機(jī)制尚不明確。本課題中我們重組克隆、表達(dá)和純化了釀酒酵母Rtf1的兩個(gè)主要參與配體相互作用的結(jié)構(gòu)域Plus3和HMD，并用圓二色譜(CD)和核磁共振(NMR)等對(duì)其結(jié)構(gòu)進(jìn)行了初步研究。我們已基本確定了異源重組制備該兩個(gè)結(jié)構(gòu)域并對(duì)其進(jìn)行多維NMR研究的合適的實(shí)

3、驗(yàn)條件，為進(jìn)一步解析其三維結(jié)構(gòu)和揭示其功能機(jī)制打下了基礎(chǔ)。
　　(Ⅱ) PDZ結(jié)構(gòu)域是介導(dǎo)蛋白與蛋白相互作用的重要結(jié)構(gòu)域之一，能夠識(shí)別靶蛋白C-末端的序列。PDZ結(jié)構(gòu)域能夠參與多樣性的生物過程如:胞內(nèi)運(yùn)輸、離子通道以及信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)等。利用生物信息學(xué)的方法，我們?cè)诓际襄F蟲基因組數(shù)據(jù)庫中發(fā)現(xiàn)幾個(gè)含PDZ結(jié)構(gòu)域的蛋白。在本課題中，我們重組克隆、表達(dá)和純化了這幾個(gè)PDZ結(jié)構(gòu)域，并對(duì)其中一個(gè)通過NMR方法對(duì)其進(jìn)行了初步結(jié)構(gòu)研究，以期為進(jìn)一步認(rèn)識(shí)