靶向ICAM-1的小分子探針對三陰性乳腺癌光學(xué)成像的探索.pdf

1、目的:探討近紅外熒光成像的小分子探針γ3-Cy5.5在靶向ICAM-1實現(xiàn)三陰性乳腺癌特異性顯像中的價值，旨在為三陰性乳腺癌的早期診斷提供無創(chuàng)、動態(tài)、特異性的手段。
　　方法:以人三陰性乳腺癌細(xì)胞系MDA-MB-231及人非三陰性乳腺癌細(xì)胞系MCF-7為研究對象。用Western Blot及流式細(xì)胞儀檢測三陰性乳腺癌細(xì)胞系MDA-MB-231及非三陰性乳腺癌細(xì)胞系MCF-7的ICAM-1表達(dá)水平。用激光共聚焦顯微鏡及流式細(xì)胞僅觀察

2、MDA-MB-231與γ3-FITC的特異性結(jié)合。通過體外競爭性抑制實驗觀察未用熒光標(biāo)記的γ3多肽片段對MDA-MB-231細(xì)胞結(jié)合γ3-FITC的阻斷作用。建立MDA-MB-231裸鼠原位乳腺癌荷瘤鼠模型，尾靜脈注射γ3-Cy5.5（50μM/200μl）之后，立刻進(jìn)行近紅外熒光活體成像，在不同的時間點采集圖像，兩個小時之后，處死荷瘤鼠，進(jìn)行離體器官成像。實驗中使用SPSS19.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)的統(tǒng)計分析，所有的定量數(shù)據(jù)表示為均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)

3、差。采用t檢驗對定量數(shù)據(jù)進(jìn)行比較，p＜0.05代表有統(tǒng)計學(xué)差異。
　　結(jié)果:1.Western blot結(jié)果顯示三陰性乳腺癌細(xì)胞系MDA-MB-231的ICAM-1蛋白表達(dá)是非三陰性乳腺癌細(xì)胞系MCF-7 ICAM-1蛋白表達(dá)的3倍，流式細(xì)胞儀檢測顯示MDA-MB-231細(xì)胞ICAM-1陽性表達(dá)的百分比為(99.12±1)％，MCF-7細(xì)胞ICAM-1陽性表達(dá)的百分比為（65.1±2.4）％，兩者相比，P＜0.01，有明顯的統(tǒng)計學(xué)

4、差異。Western blot和流式細(xì)胞儀檢測結(jié)果均提示ICAM-1在三陰性乳腺癌細(xì)胞系MDA-MB-231中呈高表達(dá)。
　　2.激光共聚焦顯微鏡顯示MDA-MB-231與γ3-FITC特異性結(jié)合，并且隨著γ3-FITC濃度增加，MDA-MB-231與γ3-FITC的結(jié)合亦增加，而MDA-MB-231對其對照探針γ3S-FITC幾乎沒有結(jié)合。流式細(xì)胞儀檢測結(jié)果顯示當(dāng)γ3-FITC濃度為2.5μM，流式細(xì)胞儀檢測到其與MDA-MB-

5、231結(jié)合比例為（4.1±0.6）％，當(dāng)γ3-FITC濃度增加到5μM時，其結(jié)合的比例為(53.33±4.31)％，當(dāng)其濃度進(jìn)一步提高到20μM時，其結(jié)合的比例增加到(99±0.9)％，而不管對照探針γ3 S-FITC的濃度為2.5μM還是20μM時，其與MDA-MB-231細(xì)胞都沒有明顯的結(jié)合，兩組相比，p值均＜0.01，這說明二者之間有明顯的統(tǒng)計學(xué)差異。另外，競爭性抑制實驗的流式細(xì)胞儀檢測結(jié)果也說明MDA-MB-231細(xì)胞與γ3-F

6、ITC結(jié)合能夠被γ3阻斷。
　　3.在注射γ3-cy5.5探針之后，三陰性乳腺癌荷瘤鼠腫瘤組織中近紅外熒光信號隨著時間推移，逐漸增加，2h達(dá)到高峰。而其對照組，注射了對照探針γ3 S-cy5.5之后，荷瘤鼠腫瘤組織中近紅外熒光信號隨著時間推移，并沒有明顯的增加。2h之后處死小鼠，取得離體器官及離體腫瘤，觀察其內(nèi)近紅外熒光信號的強度，可以看到實驗組離體腫瘤內(nèi)熒光信號強度明顯高于對照組，而在離體器官心、肝、脾、肺、腎中，目的探針和對照

7、探針的熒光信號強度并沒有統(tǒng)計學(xué)差異。對活體內(nèi)不同的時間點實驗組腫瘤部位及對照組腫瘤部位的目標(biāo)-背景比進(jìn)行定量分析，p＜0.01，二者之間有明顯的統(tǒng)計學(xué)差異。實驗組與對照組離體器官及離體腫瘤的目標(biāo)-背景比進(jìn)行定量分析，實驗組和對照組離體器官的目標(biāo)-背景比沒有統(tǒng)計學(xué)差異，而實驗組和對照組離體腫瘤的目標(biāo)-背景比，p＜0.01，二者之間有明顯的統(tǒng)計學(xué)差異。
　　結(jié)論:近紅外熒光成像的小分子探針γ3-cy5.5能與ICAM-1高表達(dá)的三陰性