慢病毒介導(dǎo)的PTPRR基因過(guò)表達(dá)和沉默小鼠模型與抑郁發(fā)生的關(guān)系研究.pdf

1、目的：
　　通過(guò)體外包裝高滴度PTPRR基因過(guò)表達(dá)和PTPRRshRNA慢病毒顆粒，將病毒顆粒經(jīng)小鼠腦立體定位術(shù)注入小鼠海馬區(qū)，構(gòu)造PTPRR基因過(guò)表達(dá)和沉默小鼠模型，比較基因過(guò)表達(dá)及基因沉默小鼠在懸尾實(shí)驗(yàn)、糖水實(shí)驗(yàn)、強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)中抑郁相關(guān)的行為變化，進(jìn)一步聯(lián)合慢性不可預(yù)知刺激（CMS）方法觀察小鼠抑郁行為的改變，初步探討動(dòng)物模型中PTPRR基因與抑郁發(fā)生的關(guān)系。
　　方法：
　　1.首先將已構(gòu)建成功的PTPRR基因過(guò)

2、表達(dá)載體及空白對(duì)照載體GFP、PTPRRshRNA載體及空白對(duì)照載體shGFP，轉(zhuǎn)染至293T細(xì)胞進(jìn)行包裝，濃縮產(chǎn)生適用于體外實(shí)驗(yàn)的高滴度病毒顆粒。
　　2.采用腦立體定位技術(shù)在小鼠海馬區(qū)微量注射慢病毒顆粒，從而引起小鼠海馬區(qū)PTPRR基因過(guò)表達(dá)及基因沉默,實(shí)驗(yàn)28天后取新鮮海馬組織,采用Western-blot、RT-PCR的方法分別檢測(cè)小鼠海馬區(qū)PTPRR蛋白及PTPRRmRNA表達(dá)改變。
　　3.80只C57BL/6J

3、小鼠隨機(jī)分為10組，每組8只，分別為：①Lenti-shPTPRR（PTPRR基因沉默）組；②lenti-shGFP（低表達(dá)空載體）組；③Lenti-PTPRR（PTPRR基因過(guò)表達(dá)）組；④lenti-GFP（高表達(dá)空載體）組；⑤control（正常對(duì)照）組；⑥Lenti-shPTPRR+CMS(PTPRR基因沉默干預(yù))組；⑦lenti-shGFP+CMS（空載體干預(yù)）組；⑧Lenti-PTPRR+CMS（PTPRR基因過(guò)表達(dá)干預(yù)）組；

4、⑨ lenti-GFP+CMS（高表達(dá)空載體干預(yù)）組；⑩control+CMS（正常對(duì)照干預(yù)）組。小鼠術(shù)后1周，第⑥-⑩組進(jìn)行CMS干預(yù)21天后，觀察比較各組小鼠抑郁行為的變化。
　　結(jié)果：
　　1.成功建立具有特異性的PTPRR高表達(dá)及PTPRRshRNA病毒包裝顆粒，病毒滴度達(dá)到1x109TU。
　　2.注射病毒28天后發(fā)現(xiàn)，Lenti-PTPRR組小鼠海馬組織PTPRRmRNA及蛋白水平與control組和Len

5、ti-GFP組明顯增高（P＜0.001）；Lenti-PTPRRshRNA組小鼠海馬組織PTPRRmRNA及蛋白水平較control組和Lenti-shGFP組明顯降低（P＜0.001）；而Lenti-GFP組與control組兩組間比較,Lenti-shGFP組與control組兩組間比較， PTPRRmRNA及蛋白水平無(wú)顯著性差異(P>0.05)。
　　3.在強(qiáng)迫游泳實(shí)中，各組間不動(dòng)時(shí)間具有顯著差異（F=28.823），Len

6、ti-GFP組和control組兩組間T檢驗(yàn)無(wú)顯著性差異;Lenti-shGFP組和control組兩組間T檢驗(yàn)無(wú)顯著性差異（P>0.05）；Lenti-PTPRR組分別與Lenti-GFP組進(jìn)行T檢驗(yàn)，小鼠不動(dòng)時(shí)間明顯延長(zhǎng)（p＜0.05）;Lenti-shPTPRR組與Lenti-shGFP進(jìn)行T檢驗(yàn)，強(qiáng)迫游泳不動(dòng)時(shí)間無(wú)顯著性改變（P＞0.05）；Lenti-PTPRR+CMS組與control+CMS組小鼠進(jìn)行T檢驗(yàn)，強(qiáng)迫游泳時(shí)間明

7、顯延長(zhǎng)（P<0.001）；Lenti-shPTPRR+CMS組與control+CMS組小鼠進(jìn)行T檢驗(yàn)，強(qiáng)迫游泳時(shí)間明顯減少（P<0.001）。
　　4.在懸尾實(shí)驗(yàn)中，各組間具有顯著性差異（F=10.215），Lenti-GFP組和control組兩組間T檢驗(yàn)無(wú)顯著性差異;Lenti-shGFP組和control組兩組間T檢驗(yàn)無(wú)顯著性差異（P>0.05）；Lenti-PTPRR組分別與Lenti-GFP組進(jìn)行T檢驗(yàn)，小鼠不動(dòng)時(shí)間無(wú)

8、明顯差異（p＞0.05）;Lenti-shPTPRR組與Lenti-shGFP進(jìn)行T檢驗(yàn)，不動(dòng)時(shí)間明顯減少（P＜0.05）；Lenti-PTPRR+CMS組與control+CMS組小鼠進(jìn)行T檢驗(yàn)，不動(dòng)時(shí)間無(wú)明顯改變（p＞0.05）；Lenti-shPTPRR+CMS組與control+CMS組小鼠進(jìn)行T檢驗(yàn)，強(qiáng)迫游泳時(shí)間明顯減少（P<0.001）。
　　5.在糖水實(shí)驗(yàn)中，各組間存在顯著性差異（F=16.19），Lenti-GFP

9、組和control組兩組間T檢驗(yàn)無(wú)顯著性差異;Lenti-shGFP組和control組兩組間T檢驗(yàn)無(wú)顯著性差異（P>0.05）；Lenti-PTPRR組分別與Lenti-GFP組進(jìn)行T檢驗(yàn)，小鼠糖水消耗率存在明顯降低，存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（p＜0.05）;Lenti-shPTPRR組與Lenti-shGFP進(jìn)行T檢驗(yàn)，糖水消耗率未有明顯改變，無(wú)統(tǒng)計(jì)差異（P＞0.05）；Lenti-PTPRR+CMS組與control+CMS組小鼠進(jìn)行T檢驗(yàn)

10、，糖水消耗明顯降低，存在統(tǒng)計(jì)差異（ p＜0.001）；Lenti-shPTPRR+CMS組與control+CMS組小鼠進(jìn)行T檢驗(yàn)，糖水消耗明顯降低，統(tǒng)計(jì)具有差異（P<0.001）。
　　結(jié)論：
　　1.成功包裝產(chǎn)生PTPRR過(guò)表達(dá)和PTPRRshRNA高滴度慢病毒顆粒；
　　2.成功建立PTPRR基因過(guò)表達(dá)和基因沉默小鼠模型；
　　3. PTPRR過(guò)表達(dá)可以引起小鼠抑郁行為的增加，PTPRR基因過(guò)可能對(duì)于應(yīng)激更