高原環(huán)境下鈣結(jié)合蛋白S100B及S100A4對(duì)成年大鼠海馬齒狀回神經(jīng)干細(xì)胞增殖分化的影響.pdf

1、目的：
　　觀察高原低壓缺氧環(huán)境對(duì)大鼠海馬齒狀回神經(jīng)發(fā)生的影響,探索低氧腦損傷后神經(jīng)發(fā)生和神經(jīng)功能修復(fù)的機(jī)制,為臨床治療中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷類(lèi)疾病提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法：
　　120只健康成年雄性SD大鼠,隨機(jī)分為兩組：模擬海拔5000米組、氣壓52.9千帕（實(shí)驗(yàn)組）和海拔2200米組、氣壓77.406千帕（對(duì)照組）。實(shí)驗(yàn)組經(jīng)模擬海拔5000米低壓氧艙處理3天，低壓缺氧3天后進(jìn)入修復(fù)期，轉(zhuǎn)移至海拔2200米環(huán)境下飼養(yǎng)，對(duì)

2、照組不經(jīng)模擬海拔5000米低壓氧艙預(yù)處理，直接在海拔2200米環(huán)境飼養(yǎng)。兩組又分為缺氧損傷后低海拔環(huán)境修復(fù)1、3、7、14、28天五個(gè)亞組，每組12只。在相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)行腦組織取材。分別采用H-E染色、Nissl染色觀察腦組織形態(tài)學(xué)的變化；采用BrdU標(biāo)記，免疫組化染色檢測(cè)BrdU陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)，觀察神經(jīng)干細(xì)胞增殖能力變化；免疫熒光雙標(biāo)檢測(cè)BrdU和DCX、GFAP的共表達(dá)，觀察神經(jīng)干細(xì)胞的分化能力；采用免疫組化染色檢測(cè)鈣結(jié)合蛋白家族S100

3、B(S100蛋白家族B)、S100A4(S100蛋白家族A4)陽(yáng)性表達(dá)細(xì)胞的分布和數(shù)量變化；并采用qRT-PCR檢測(cè)S100B、S100A4基因表達(dá)情況。
　　結(jié)果：
　　（1）H-E染色結(jié)果顯示，對(duì)照組相比較，實(shí)驗(yàn)組在缺氧損傷后1天至3天，海馬顆粒細(xì)胞損傷明顯，出現(xiàn)形態(tài)不規(guī)則的異性細(xì)胞或呈空泡狀的細(xì)胞，并出現(xiàn)核濃縮的凋亡細(xì)胞。Nissl染色結(jié)果顯示，與對(duì)照組相比較，1天、3天及7天實(shí)驗(yàn)組大鼠海馬區(qū)變性/壞死細(xì)胞明顯增多（p

4、<0.05），神經(jīng)細(xì)胞數(shù)量減少、細(xì)胞排列較紊亂，可觀察到深染的變性細(xì)胞。
　?。?）BrdU免疫組化染色結(jié)果：實(shí)驗(yàn)組BrdU陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)在低壓缺氧損傷后第7、14、28天明顯高于對(duì)照組對(duì)應(yīng)時(shí)間點(diǎn)（p<0.05）。
　　（3）BrdU/DCX和BrdU/GFAP免疫熒光雙標(biāo)結(jié)果：高海拔環(huán)境中，低氧損傷后海馬齒狀回存在DCX和GFAP陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)。
　?。?）S100B免疫組化染色結(jié)果：實(shí)驗(yàn)組S100B蛋白的表達(dá)在低壓缺氧損

5、傷后第1、3天明顯高于對(duì)照組對(duì)應(yīng)時(shí)間點(diǎn)（p<0.05），其他時(shí)間點(diǎn)S100B蛋白表達(dá)量無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，S100B蛋白的表達(dá)和海馬形態(tài)組織結(jié)構(gòu)損傷的程度基本相一致。
　　（5）S100A4免疫組化染色結(jié)果：實(shí)驗(yàn)組S100A4蛋白的表達(dá)在低壓缺氧損傷后第3、7、14天明顯高于對(duì)照組對(duì)應(yīng)時(shí)間點(diǎn)（p<0.05），28天組蛋白表達(dá)量無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，和神經(jīng)干細(xì)胞增殖的時(shí)間點(diǎn)基本一致;
　?。?）qRT-PCR檢測(cè)S100B、S100A4基因

6、表達(dá)，結(jié)果顯示，實(shí)驗(yàn)組S100A4基因在低氧損傷后3天、7天、14天組表達(dá)明顯高于對(duì)照祖（p<0.05）；實(shí)驗(yàn)組S100B基因在低氧損傷后1天、3天組表達(dá)明顯高于對(duì)照組（p<0.05）。
　　結(jié)論：
　　1、高海拔低壓缺氧刺激,激活大鼠海馬齒狀回顆粒細(xì)胞下層的神經(jīng)干細(xì)胞增殖。
　　2、低壓缺氧腦損傷后大鼠海馬齒狀回增殖的神經(jīng)干細(xì)胞可以分化為神經(jīng)元或神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞。
　　3、高海拔低壓缺氧刺激可誘導(dǎo)鈣結(jié)蛋白S100B