不同時機艾灸對寒濕凝滯型痛經(jīng)大鼠子宮組織微血管密度及血管活性物質(zhì)含量的影響.pdf

1、目的：觀察不同時機艾灸干預(yù)對寒濕凝滯型原發(fā)性痛經(jīng)（PD）大鼠行為學(xué)、子宮組織微血管密度（MVD）、子宮組織前列腺素F2α（PGF2α）、前列腺素E2（PGE2）、加壓素（AVP）、一氧化氮（NO）、內(nèi)皮素（ET-1）含量以及血漿血栓素B2（TXB2）、6-酮-前列腺素F1α（6-keto-PGF1α）含量的影響，以探討其對寒濕凝滯型原發(fā)性痛經(jīng)模型大鼠止痛效應(yīng)影響的差異性及其可能的作用機制。以期為臨床選擇最佳時機的艾灸介入治療寒濕凝滯型原

2、發(fā)性痛經(jīng)提供可靠的實驗依據(jù)。
　　方法：將60只Wistar雌性大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)7 d后，采用陰道涂片法，篩選出處于動情間期大鼠45只，并將其隨機分為對照組（Control）、模型組（Model）、預(yù)先灸組（Pre-Mox）、即刻灸組（Im-Mox）和預(yù)先即刻灸組（P&I-Mox）（每組9只）。對照組于大鼠股部給予皮下注射生理鹽水，1次/d，連續(xù)10 d（第1 d、10 d注射0.5 mL/只，第2~9 d0.2 mL/只）。其余4

3、組大鼠均采用（0±1）℃冰水浴結(jié)合苯甲酸雌二醇注射法制備寒濕凝滯型痛經(jīng)模型，將大鼠后肢及下腹部浸入（0±1）℃冰水混合物中（室溫23±2℃）進行寒冷刺激，1次/d，20 min/次，同時給予大鼠股部皮下注射苯甲酸雌二醇，1次/d，連續(xù)10 d（第1 d、10 d注射0.5 mg/只，第2~9 d0.2 mg/只）。預(yù)先灸組于造模期間第8 d開始治療，第10 d結(jié)束治療，共3 d；即刻灸組于造模第11 d注射完縮宮素后（即痛經(jīng)模型復(fù)制成功

4、后）開始治療，共1d；預(yù)先即刻灸組于造模期間第8d開始治療，第11 d結(jié)束治療，共4 d。3個艾灸組均采用直徑為7 mm粗細(xì)的艾條，于神闕、關(guān)元穴處同時施溫和灸，10 min/穴，1次/d。對照組、模型組均采用與艾灸組相同的體位固定，10 min/次，1次/d。除對照組外，其余4組寒濕凝滯型PD模型大鼠模型均注射縮宮素后觀察其行為學(xué)反應(yīng)，待行為學(xué)檢測結(jié)束后，將大鼠斷頭取血后，于冰盤上迅速分離出“Y”字形子宮左側(cè)子宮組織，以冷藏的生理鹽水

5、洗凈拭干稱重，加入生理鹽水碾磨，制成30％的子宮組織勻漿，于低溫4℃時3000 rpm離心15 min，取上清液，用放射免疫分析法檢測大鼠子宮組織PGE2、AVP、ET-1含量，酶聯(lián)免疫法檢測大鼠子宮組織PGF2α含量，生物化學(xué)技術(shù)檢測大鼠子宮組織NO含量。右側(cè)子宮組織用濃度為4%的多聚甲醛溶液進行固定，石蠟包埋、切片，一部分采用免疫組化法檢測子宮組織MVD，剩余部分用于HE染色，于光鏡下觀察各組大鼠子宮組織MVD和子宮組織細(xì)胞的形態(tài)學(xué)

6、改變。
　　結(jié)果：
　　1.不同時機艾灸對寒濕凝滯型PD大鼠行為學(xué)的影響:扭體行為學(xué)觀察結(jié)果顯示：艾灸干預(yù)后，預(yù)先灸組、即刻灸組、預(yù)先即刻灸組痛經(jīng)大鼠的潛伏期均明顯延長、扭體次數(shù)減少、扭體總分降低，與模型組比較，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義；3個艾灸組相比，即刻灸組、預(yù)先即刻灸組較預(yù)先灸組痛經(jīng)大鼠的扭體次數(shù)及扭體總分均明顯減少和降低，預(yù)先即刻灸組較預(yù)先灸組痛經(jīng)大鼠的潛伏期明顯延長；預(yù)先即刻灸組與即刻灸組比較，預(yù)先即刻灸組較即刻灸組痛經(jīng)

7、大鼠的潛伏期明顯延長、扭體次數(shù)及扭體總分均明顯減少和降低。
　　2.不同時機艾灸對寒濕凝滯型PD大鼠子宮組織細(xì)胞病理形態(tài)學(xué)的影響:子宮組織HE染色后，置于光鏡下，一般形態(tài)學(xué)觀察顯示：對照組大鼠子宮組織形態(tài)規(guī)則，無水腫，大量中性粒細(xì)胞；模型組大鼠子宮組織形態(tài)較規(guī)則，組織嚴(yán)重水腫，充血，大量中性粒細(xì)胞和淋巴細(xì)胞；預(yù)先灸組、即刻灸組、預(yù)先即刻灸組大鼠子宮組織均形態(tài)規(guī)則，組織輕度水腫，無充血，大量中性粒細(xì)胞，少量淋巴細(xì)胞。
　　3.

8、不同時機艾灸對寒濕凝滯型PD大鼠子宮組織MVD值的影響:模型組大鼠子宮組織MVD明顯減少，與對照組比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義；預(yù)先灸組、即刻灸組、預(yù)先即刻灸組與模型組比較，3個艾灸組痛經(jīng)大鼠子宮組織MVD均明顯增多，差異有統(tǒng)計學(xué)意義；預(yù)先即刻灸組與預(yù)先灸組比較，預(yù)先即刻灸組較預(yù)先灸組MVD明顯增多；即刻灸組與預(yù)先灸組比較，即刻灸組較預(yù)先灸組MVD雖有數(shù)值差異，但無統(tǒng)計學(xué)差異。預(yù)先即刻灸組與即刻灸組比較，預(yù)先即刻灸組較即刻灸組雖有數(shù)值差異，但

9、無統(tǒng)計學(xué)差異。
　　4.不同時機艾灸對寒濕凝滯型PD大鼠血漿TXB2和6-keto-PGF1α含量的影響:模型組痛經(jīng)大鼠血漿TXB2含量及TXB2/6-keto-PGF1α比值均明顯升高、6-keto-PGF1α含量明顯降低，與對照組相比，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義；艾灸干預(yù)后，預(yù)先灸組、即刻灸組、預(yù)先即刻灸組痛經(jīng)大鼠血漿TXB2含量及TXB2/6-keto-PGF1α比值均明顯降低、6-keto-PGF1α含量明顯升高，與模型組相比，差

10、異均有統(tǒng)計學(xué)意義；預(yù)先即刻灸組與預(yù)先灸組比較，預(yù)先即刻灸組較預(yù)先灸組痛經(jīng)大鼠血漿TXB2含量及TXB2/6-keto-PGF1α比值均明顯降低，6-keto-PGF1α含量明顯升高；即刻灸組與預(yù)先灸組比較，即刻灸組較預(yù)先灸組血漿TXB2、6-keto-PGF1α含量及TXB2/6-keto-PGF1α比值雖有數(shù)值差異，但無統(tǒng)計學(xué)意義；預(yù)先即刻灸組與即刻灸組比較，預(yù)先即刻灸組較即刻灸組痛經(jīng)大鼠血漿 TXB2含量及 TXB2/6-keto-

11、PGF1α比值均明顯降低、6-keto-PGF1α含量明顯升高。
　　5.不同時機艾灸對寒濕凝滯型PD大鼠子宮組織PGF2α、PGE2含量及PGF2α/PGE2比值的影響：模型組痛經(jīng)大鼠子宮組織PGF2α的含量及PGF2α/PGE2比值均明顯升高，PGE2的含量明顯降低，與對照組比較，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義。艾灸干預(yù)后，預(yù)先灸組、即刻灸組、預(yù)先即刻灸組痛經(jīng)大鼠子宮組織PGF2α的含量及PGF2α/PGE2比值均明顯降低、PGE2含量明

12、顯升高，與模型組相比，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義。預(yù)先即刻灸組與預(yù)先灸組比較，預(yù)先即刻灸組較預(yù)先灸組子宮組織PGF2α的含量及PGF2α/PGE2比值均明顯降低，PGE2的含量明顯升高。即刻灸組與預(yù)先灸組比較，即刻灸組較預(yù)先灸組 PGF2α的含量及PGF2α/PGE2比值均明顯降低，PGE2含量明顯升高。預(yù)先即刻灸組與即刻灸組比較，預(yù)先即刻灸組較刻灸組痛經(jīng)大鼠子宮組織PGF2α的含量及PGF2α/PGE2比值均明顯降低，PGE2的含量明顯升高。

13、
　　6。不同時機艾灸對寒濕凝滯型PD大鼠子宮組織AVP含量的影響：模型組痛經(jīng)大鼠子宮組織AVP的含量明顯升高，與對照組比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義。艾灸干預(yù)后，預(yù)先灸組、即刻灸組、預(yù)先即刻灸組3個艾灸組痛經(jīng)大鼠子宮組織AVP含量均明顯降低，與模型組比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義。預(yù)先即刻灸組、即刻灸組、預(yù)先灸組3組兩兩比較，3組子宮組織AVP含量雖各有數(shù)值差異，但無統(tǒng)計學(xué)意義。
　　7.不同時機艾灸對寒濕凝滯型PD大鼠子宮組織ET-1、

14、NO含量的影響:模型組痛經(jīng)大鼠子宮組織ET-1的含量明顯升高，NO的含量明顯降低，與對照組比較，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義。艾灸干預(yù)后，預(yù)先灸組、即刻灸組、預(yù)先即刻灸組痛經(jīng)大鼠子宮組織ET-1的含量明顯降低、NO含量明顯升高，與模型組相比，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義。預(yù)先即刻灸組與預(yù)先灸組比較，預(yù)先即刻灸組較預(yù)先灸組子宮組織ET-1的含量明顯降低、NO的含量明顯升高。即刻灸組與預(yù)先灸組比較，即刻灸組較預(yù)先灸組ET-1的含量明顯降低、NO含量明顯升高。預(yù)

15、先即刻灸組與即刻灸組比較，預(yù)先即刻灸組較刻灸組痛經(jīng)大鼠子宮組織ET-1的含量明顯降低、NO的含量明顯升高。
　　結(jié)論：
　　1.預(yù)先灸、即刻灸及預(yù)先即刻灸的不同時機介入均可明顯減輕寒濕凝滯型PD大鼠腹部收縮及扭體反應(yīng)，明顯延長其潛伏期，但其效果尤以預(yù)先即刻灸最為明顯，即刻灸次之。說明不同時機艾灸對寒濕凝滯型PD模型大鼠均有良好的鎮(zhèn)痛效果，但預(yù)先即刻灸的效果更加顯著。
　　2.三種不同時機艾灸均可改善寒濕凝滯型PD模型大

16、鼠子宮組織充血、水腫狀態(tài)。但預(yù)先灸、即刻灸及預(yù)先即刻灸3組之間對大鼠子宮組織病理形態(tài)學(xué)改變無明顯差異。
　　3.三種不同時機艾灸均可增加寒濕凝滯型PD模型大鼠子宮組織MVD，有效改善子宮局部微循環(huán)。但其中尤以預(yù)先即刻灸組效果最佳，明顯優(yōu)于預(yù)先灸和即刻灸。其作用可能是通過艾火的溫通、經(jīng)絡(luò)的傳熱及神經(jīng)的傳遞對子宮產(chǎn)生的熱效應(yīng)，以增加血流量，改變局部血液循環(huán)，進而達到緩解疼痛之目的。
　　4.三種不同時機艾灸均可降低寒濕凝滯型PD

17、模型大鼠血漿TXB2含量及TXB2/6-keto-PGF1α比值；升高6-keto-PGF1α的含量，其中尤以預(yù)先即刻灸最為明顯。說明不同時機艾灸對上述各項指標(biāo)水平均有良好的調(diào)節(jié)作用，但預(yù)先即刻灸的調(diào)節(jié)作用更加顯著。其作用機制可能是通過調(diào)節(jié)血小板活性和血管張力，改善血管收縮狀態(tài)，使子宮局部血流量增加，而達到止痛之目的。
　　5.三種不同時機艾灸均可降低寒濕凝滯型PD模型大鼠子宮組織PGF2α含量及PGF2α/PGE2比值；提高PG

18、E2的水平，但其作用尤以預(yù)先即刻灸最為明顯，即刻灸次之。說明不同時機艾灸對PGF2α和PGE2的異常水平均有良好的調(diào)節(jié)作用，且預(yù)先即刻灸的調(diào)節(jié)作用更加顯著，其作用機制可能是通過恢復(fù)PGF2α和PGE2的平衡，改善機體內(nèi)分泌環(huán)境，進而抑制子宮平滑肌及血管痙攣性收縮，改善局部的缺血缺氧狀態(tài)，從而起到鎮(zhèn)痛作用。
　　6.三種不同時機艾灸均可明顯降低寒濕凝滯型PD模型大鼠子宮組織AVP含量，且三者之間無明顯差異。其作用機制可能是通過降低A