Exendin-4減輕脂肪來源間充質(zhì)干細胞氧化應激損傷的機制研究.pdf

1、目的:心肌梗死是危害人類健康的頭號殺手。由于冠狀動脈的持續(xù)阻塞，導致心肌出現(xiàn)缺血性壞死，隨后形成疤痕修復，并緩慢進展為心功能不全。常用的治療手段如介入治療、外科動脈搭橋術等可以通過開通受阻血管、恢復血流，從而顯著降低心肌缺血的程度和范圍。但是這些方法都無法從根本上挽救已經(jīng)壞死的心肌。近20年來，干細胞移植技術通過再生心肌及旁分泌功能，修復心梗后壞死損傷的組織細胞，成為改善患者心功能和臨床預后的治療方法之一。在各種種子細胞中，脂肪來源間充

2、質(zhì)干細胞(ADMSCs)已被很多臨床和動物實驗證實可以優(yōu)化心梗后的治療，國外正在進行兩個有關ADMSCs治療的臨床Ⅰ期試驗。然而，人們發(fā)現(xiàn)限制ADMSCs在臨床上進一步應用的主要難題在于心梗后移植的細胞在一周內(nèi)大量死亡，從而導致了移植效率低下。其主要機制是由于移植后的細胞不耐受心梗后的氧化應激微環(huán)境，進而出現(xiàn)細胞凋亡壞死。因此，探討氧化應激致細胞凋亡的關鍵信號通路并以此為靶點來提高細胞抗氧化應激損傷的能力是目前的研究熱點。Exendin

3、-4是GLP-1類似物，擁有減輕炎癥反應、抗氧化應激等多種細胞保護效應，本研究旨在闡明氧化應激介導ADMSCs凋亡的關鍵信號通路;通過Exendin-4干預來降低ADMSCs氧化應激損傷，提高ADMSCs的存活能力。
　　方法:從大鼠腹股溝處的脂肪組織提取ADMSCs，流式細胞學及多向分化潛能檢測鑒定ADMSCs;觀察不同濃度Exendin-4對ADMSCs體外增殖能力的影響及細胞表面GLP-1R受體表達的影響;建立過氧化氫誘導氧

4、化應激凋亡模型，明確caspase9介導的線粒體凋亡通路在細胞凋亡中的作用;使用Exendin-4干預過氧化氫誘導的氧化應激損傷凋亡過程，利用通路阻斷劑和干擾RNA技術，闡明 PI3K/Akt-Sfrp2在Exendin-4抗凋亡過程中的機制。
　　結果:
　　1.分離培養(yǎng)的ADMSCs表面抗原為CD31-、CD34-、CD45-、CD29+、CD90+。
　　2.ADMSCs能夠在誘導培養(yǎng)基中向骨及脂肪細胞分化。

5、r>　　3.Exendin-4能夠以劑量依賴方式提高體外培養(yǎng)時ADMSCs的數(shù)目。
　　4.過氧化氫處理提高ADMSCs凋亡細胞的數(shù)量，胞內(nèi)ROS、MDA的水平提高而GSH和SOD的含量下降，同時線粒體膜電位表現(xiàn)為低電勢，細胞色素C滲漏至胞質(zhì)胞核中;凋亡蛋白(Bax、caspase9和caspase3)表達上調(diào)，保護性蛋白(Bcl-2、c-IAP1和c-IAP2)表達下降。
　　5.Exendin-4預處理后降低過氧化氫條件

6、下凋亡細胞數(shù)目，同時上調(diào)GSH和SOD而抑制胞內(nèi)ROS和MDA含量;維持線粒體正常高電位，抑制細胞色素C的滲漏;下調(diào)凋亡蛋白并提高保護性蛋白的表達。
　　6.Exendin-4可以借由PI3K/Akt信號途徑激活Sfrp2，使用LY294002阻斷PI3K/Akt通路或是使用siRNA敲低Sfrp2的表達可以抑制Exendin-4對ADMSCs線粒體膜電位、凋亡相關蛋白的調(diào)控作用，逆轉(zhuǎn)Exendin-4的抗凋亡作用。
　　結