杏香兔耳風(fēng)抗菌活性成分作用機(jī)制研究.pdf

1、本論文由四部分組成。第一章綜述了金黃色葡萄球菌病原特征、致病性、中藥抑菌成分、抑菌方法及機(jī)制。第二章研究了杏香兔耳風(fēng)Ainsliaea bonatii Beauv.中對(duì)苯二酚和熊果苷對(duì)六種受試菌株的體外抗菌活性。第三章通過(guò)研究對(duì)苯二酚對(duì)受試菌的 、AKP含量、電導(dǎo)率、胞外蛋白含量、SDS-PAGE電泳分析、SEM等方面的變化，探明對(duì)苯二酚對(duì)SA、MRSA和β-Lactamase producingStaphylococcus aureu

2、s的抑菌作用機(jī)制。第四章采用HPLC法，建立了杏香兔耳風(fēng)全草中熊果苷和對(duì)苯二酚的含量測(cè)定方法；建立了以離子液體為萃取劑，測(cè)定杏香兔耳風(fēng)不同部位中熊果苷和對(duì)苯二酚2種化合物含量的方法。
　　第一章中藥抑菌成分及機(jī)制研究進(jìn)展
　　本章對(duì)金黃色葡萄球菌病原特征、致病性，中草藥抑菌成分、體內(nèi)外抑菌方法及體外抑菌機(jī)制的研究進(jìn)展進(jìn)行綜述。
　　第二章對(duì)苯二酚和熊果苷對(duì)受試菌的體外抗菌活性研究
　　采用紙片擴(kuò)散法(K-B法)分

3、別測(cè)定杏香兔耳風(fēng)中對(duì)苯二酚和熊果苷對(duì)受試菌的抑菌圈大小(IZ)和最低抑菌濃度(MIC)；液體培養(yǎng)法測(cè)定半數(shù)抑制濃度(IC50)；液體培養(yǎng)法和平面劃線法測(cè)定最低殺菌濃度(MBC)。結(jié)果顯示，對(duì)苯二酚和熊果苷對(duì)SA、MRSA和β-Lactamase producingS.aureus均有一定的抗菌活性，但對(duì)EC、ESBLs-EC和PA未顯示抗菌活性。其中，對(duì)苯二酚對(duì)SA、MRSA和β-Lactamase producingS.aureus的

4、MIC分別為0.31、1.25和0.63mg/mL，熊果苷對(duì)SA、MRSA和β-Lactamase producing S. aureus的MIC分別為2.5、10.0和10.0 mg/mL；對(duì)苯二酚對(duì)SA、MRSA和β-Lactamase producing S. aureus的IC50分別為1.09±0.05、1.74±0.06和1.17±0.01 mg/mL，熊果苷對(duì)SA、MRSA和β-Lactamase producingS.a

5、ureus的IC50分別為8.42±0.02、16.74±0.04和18.14±0.02 mg/mL。
　　第三章對(duì)苯二酚抑菌機(jī)制的研究
　　通過(guò)研究受試菌的AKP含量、電導(dǎo)率、胞外可溶性蛋白含量、菌體蛋白SDS-PAGE電泳和菌體形態(tài)SEM電鏡等方面的變化，探討對(duì)苯二酚對(duì)SA、MRSA和β-Lactamase producing S. aureus的抑菌機(jī)制。
　　研究表明：對(duì)苯二酚作用于細(xì)菌，導(dǎo)致細(xì)菌細(xì)胞壁和細(xì)胞膜

6、破壞，通透性增加，細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)外漏；同時(shí)還影響了細(xì)菌蛋白質(zhì)合成和相關(guān)基因表達(dá)，使相應(yīng)的蛋白質(zhì)合成減少。
　　第四章離子液體/HPLC法測(cè)定杏香兔耳風(fēng)中熊果苷和對(duì)苯二酚的含量
　　本章采用HPLC法，使用Purospher star RP-C18柱（250mm×4.6mm,5μm），以甲醇-0.4％磷酸水為流動(dòng)相，流速0.65 mL/min，低壓洗脫，檢測(cè)波長(zhǎng)為286nm，柱溫室溫(26±2℃)。結(jié)果顯示熊果苷進(jìn)樣量在0.35~

7、3.5μg范圍內(nèi)呈線性關(guān)系（r=1.0000,n=6），平均回收率為99.75%；對(duì)苯二酚進(jìn)樣量在0.025~0.25μg范圍內(nèi)呈線性關(guān)系（r=1.0000, n=6），平均回收率為98.04%。
　　建立以離子液體1-丁基-3-甲基咪唑溴化物([BMIM]Br)、1-丁基-3-甲基咪唑四氟硼酸鹽([BMIM]BF4)、1-丁基-3-甲基咪唑六氟磷酸鹽([BMIM]PF6)和1-己基-3-甲基咪唑六氟磷酸鹽([HMIM]PF6)作

8、為萃取劑，甲醇、乙腈和乙醇作為分散劑，超聲輔助萃取結(jié)合反相高效液相色譜法/紫外檢測(cè)器同時(shí)測(cè)定杏香兔耳風(fēng)不同部位中熊果苷和對(duì)苯二酚2種化合物含量的方法。以甲醇-0.4%磷酸水為流動(dòng)相，低壓洗脫，流速0.65 mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為286 nm。結(jié)果顯示，過(guò)50目篩的杏香兔耳風(fēng)根部位粉末，以固液比1:60(g/mL)時(shí)0.7 mol/L的[BMIM]BF4甲醇溶液提取率最高。熊果苷進(jìn)樣量在1.4~14.0μg范圍內(nèi)呈線性關(guān)系（r=1.00