尾加壓素Ⅱ受體拮抗劑urantide減輕自發(fā)性2型糖尿病小鼠心肌纖維化.pdf

1、【背景】：糖尿病心肌病(diabetic cardiomyopathy，DC)作為糖尿病的主要并發(fā)癥之一，越來越受到人們的關(guān)注。其中心肌纖維化是其病理學(xué)改變的基本特征之一，具體機(jī)制尚未完全闡明。尾加壓素 II(urotensin II，UII)是迄今發(fā)現(xiàn)的最強(qiáng)的縮血管活性肽，在多種心血管疾病中發(fā)揮著重要作用。但是，UII在糖尿病心肌纖維化過程中的作用及其機(jī)制尚未完全闡明。
　　【目的】：本研究在自發(fā)性2型糖尿病小鼠模型上，觀察了尾

2、加壓素II（Urotensin II，UII）及其受體GPR14（Urotensin II receptor，UT）在小鼠心肌纖維化過程中的變化，以及這些變化和內(nèi)皮細(xì)胞向間質(zhì)細(xì)胞表型轉(zhuǎn)化(endothelial-to-mesenchymal transition，End-MT)之間的關(guān)系[以CD31和VE-cadherin（VE鈣粘蛋白）作為內(nèi)皮細(xì)胞標(biāo)志物，以FSP1和α-SMA作為間質(zhì)細(xì)胞標(biāo)志物]，并探討了加用UII受體拮抗劑uran

3、tide處理能否減輕糖尿病心肌纖維化發(fā)生和發(fā)展。
　　【方法】：8-9周齡的雄性KK/Upj-Ay/J小鼠28只給予高脂飼料喂養(yǎng)6周，同周齡的雄性C57BL/6J小鼠14只，給予普通飼料喂養(yǎng)6周。于第6周末根據(jù)空腹血糖值將KK/Upj-Ay/J小鼠隨機(jī)分為兩組，即糖尿病組（DM）和糖尿病+urantide（DM+urantide）組，以C57BL/6J小鼠為正常對(duì)照組（control）。DM+urantide組小鼠在肩胛間皮下植入

4、Alzet Osmotic Pumps泵（ALZET Pump Models2004）以30μg/kg/d的劑量給藥，持續(xù)4周，其余兩組除未植入Alzet Osmotic Pumps泵外，余處理相同。記錄給藥后每周各組小鼠飲水量、飲食量和體重變化；第6、8、10周尾靜脈剪尾采血測量空腹血糖值；第10周末，采用放射免疫法檢測血漿UII含量；酶聯(lián)免疫法檢測血漿TGF-β1含量、血清胰島素含量；心肌組織HE染色、Masson染色觀測心肌形態(tài)學(xué)

5、變化及膠原沉積情況；采用免疫組化染色法檢測心肌UII/UT、CD31、FSP1、TGF-β、CTGF含量的變化； western blot法檢測UT、α-SMA、VE-cadherin（VE鈣粘蛋白）以及p-smad2/3、CTGF表達(dá)情況。
　　【結(jié)果】：第10周末，DM組小鼠體重、空腹血糖值、血清胰島素水平、飲食量及飲水量較control組顯著增加（p<0.001）。心肌HE染色及Masson染色顯示DM組小鼠心肌組織排列紊亂

6、，心肌細(xì)胞肥大、肌纖維斷裂、膠原表達(dá)增多，心肌纖維化嚴(yán)重。Western blot結(jié)果表明DM組小鼠心肌組織UT表達(dá)量較control組顯著上調(diào)（p<0.05）；免疫組化結(jié)果顯示DM組小鼠UII及UT表達(dá)量較control組明顯增加；免疫組化及Western blot結(jié)果表明DM組小鼠間質(zhì)細(xì)胞標(biāo)記物，F(xiàn)SP-1、α-SMA表達(dá)量較control組小鼠顯著增加（p<0.001），同時(shí)，內(nèi)皮細(xì)胞標(biāo)記物，CD31、VE鈣粘蛋白表達(dá)量顯著減少（

7、p<0.05）；DM組小鼠血漿TGF-β1含量、p-smad2/3的水平和結(jié)締組織生長因子（CTGF）表達(dá)量較正常對(duì)照組顯著增高（p<0.05，p<0.001）。在經(jīng)過應(yīng)用UT拮抗劑urantide四周后，DM+urantide組小鼠體重、空腹血糖值、血清胰島素含量、飲水量、飲食量較DM組小鼠都顯著下降（p<0.01）；DM+urantide組小鼠心肌HE染色和Masson染色結(jié)果顯示其心肌細(xì)胞排列情況較DM組小鼠好轉(zhuǎn)，膠原表達(dá)量下降。

8、DM+urantide組小鼠血漿UII含量較DM組下調(diào)（p<0.05），DM+urantide組小鼠心肌組織 UII、UT及FSP-1的免疫組織化學(xué)染色結(jié)果和UT、α-SMA，p-samd2/3，CTGF的Western blot都較DM組小鼠顯著下降（p<0.01），同時(shí)，CD31、VE鈣粘蛋白的免疫組化結(jié)果和蛋白印跡結(jié)果都顯著增高（p<0.05）。
　　【結(jié)論】：本研究為UII/UT系統(tǒng)參與End-MT和心臟纖維化過程提供了新