青蒿琥酯聯(lián)合卡鉑對非小細胞肺癌A549細胞增殖、凋亡及細胞周期的作用.pdf

1、目的：
　　晚期非小細胞肺癌的標準一線治療方案中，以鉑類為主或聯(lián)合鉑類的方案仍占較高比例，但與其他化療藥物聯(lián)用時，極易引發(fā)嚴重的不良反應，包括腎毒性，胃腸道反應，耳毒性及血液系統(tǒng)毒性等。本研究以卡鉑聯(lián)合吉西他濱作為參照，通過多種體外實驗，研究青蒿琥酯單藥聯(lián)合鉑類化療藥物卡鉑對非小細胞肺癌細胞 A549細胞增殖、凋亡及細胞周期的作用，旨在探討青蒿琥酯聯(lián)合卡鉑應用于非小細胞肺癌治療的可行性，為尋找新的臨床治療非小細胞肺癌化療方案提供科

2、學的實驗依據(jù)。
　　方法：
　　1.應用MTT法初步測定青蒿琥酯（Artesunate，ART）,卡鉑（Carboplatin，CBP），吉西他濱（Gemcitabine，Gem）抑制 A549細胞增殖的半數(shù)抑制濃度（half maximal inhibitory concentration，IC50）。
　　2.選擇低毒單藥劑量（抑制率≤30％的單藥濃度），作為聯(lián)合用藥實驗濃度，應用 MTT法測定青蒿琥酯聯(lián)合卡鉑，吉

3、西他濱聯(lián)合卡鉑對 A549細胞增殖的影響。繼而評估聯(lián)合用藥組的作用類型，為后續(xù)實驗選定藥物分組（①ART單藥組，②CBP單藥組，③Gem單藥組，④ART+CBP聯(lián)合用藥組,⑤Gem+CBP聯(lián)合用藥組）。
　　3.采用平板克隆形成實驗觀察三種低劑量單藥及聯(lián)合用藥后對A549細胞克隆增殖能力的影響。
　　4.應用流式細胞術檢測上述各組藥物對A549肺癌細胞凋亡和細胞周期的影響。
　　5.采用Tunel法觀察各組藥物對A54

4、9細胞凋亡形態(tài)的改變。
　　6.應用Western Blot技術檢測上述選定藥物分組對 A549凋亡相關蛋白（Bax、Bcl-2、P53、Casepase-3）的表達水平的影響及ART單藥組，CBP單藥組，ART+CBP聯(lián)合用藥組對 A549在 G2/M期相關蛋白（CyclinB1、P21、P34）的表達水平的影響。
　　結果：
　　1.青蒿琥酯抑制A549細胞體外增殖，且呈現(xiàn)一定的濃度依賴性，經(jīng) SPSS22.0計算

5、，IC50為22.3μg/ml。低劑量青蒿琥酯與卡鉑聯(lián)合應用，對A549的增殖抑制作用具有協(xié)同或相加效應。
　　2.青蒿琥酯及卡鉑單藥對A549細胞克隆形成率較對照組分別降低了15.7%，29.3%，ART聯(lián)合CBP對A549的克隆形成率則顯著降低了40.8%。
　　3.青蒿琥酯單藥主要誘導細胞發(fā)生早期凋亡，與CBP聯(lián)合作用后，與單藥組相比，能誘導更多的細胞凋亡，且凋亡細胞主要處于凋亡早期。
　　4.青蒿琥酯單藥將A5

6、49細胞周期阻滯在G2/M期，卡鉑單藥阻滯在S期，兩藥聯(lián)合作用時在G2/M期細胞比例較陰性對照組有明顯增加。
　　5.Tunel鏡檢結果可見：ART單藥組及ART+CBP聯(lián)合用藥組與對照組細胞相比，可見明顯凋亡細胞，形態(tài)見核固縮，邊聚較為明顯。
　　6.Western Blot結果顯示：與對照組相比，ART+CBP組中促凋亡蛋白Bax、P53、caspase-3的表達顯著升高，凋亡抑制相關蛋白Bcl-2的表達明顯降低；G2/