GCK基因突變引起的先天性高胰島素血癥2例的基因分析及功能學(xué)研究.pdf

1、背景:
　　先天性高胰島素血癥(congenital hyperinsulinism，CHI)又稱嬰兒持續(xù)性高胰島素血癥性低血糖癥(persistent hyperinsulinemic hypoglycemia ofinfancy，PHHI)是一類復(fù)雜多樣的罕見性疾病，由Aynsley Green在1981年首次報道，是嬰兒持續(xù)性低血糖中最常見的原因。本病的病因及發(fā)病機制目前尚未完全清楚，其病理生理基礎(chǔ)是胰島β細胞持續(xù)不適當(dāng)分泌

2、胰島素導(dǎo)致嚴重低血糖。目前分子遺傳學(xué)的研究表明，至少有9種基因突變與CHI有關(guān)，其中最常見的是由編碼ATP敏感性鉀離子通道（KATP通道）Kir6.2亞單位和SUR1亞單位蛋白的KCNJ11基因和ABCC8基因突變引起的。而編碼葡萄糖激酶(GCK)的GCK基因突變屬于其中的罕見類型，于1998年首次報道[1]，目前報道僅為9個家系和9個散發(fā)病例，亞洲人群未見報道。
　　研究一 2例CHI患者致病基因的分析
　　目的:

3、　　探討2例先天性高胰島素血癥的臨床特點和分子遺傳學(xué)特征。
　　方法:
　　對我院2例先天性高胰島素血癥的患者進行臨床資料的總結(jié)，抽提相關(guān)家系成員的基因組DNA，聚合酶鏈式反應(yīng)(PCR)擴增后進行CHI可能致病基因（ABCC8、KCNJ11、GLUD1、GCK、HNF4A、HNF1A）的直接測序。
　　結(jié)果:
　　2例先天性高胰島素血癥患者均為GCK基因突變所引起，GCK基因突變的位點分別是c.589 A＞G和c

4、.269 A＞G，導(dǎo)致的突變?yōu)閜.M197V和p.K90R。
　　結(jié)論:
　　亞洲人群可以出現(xiàn)GCK基因突變引起的先天性高胰島素血癥（GCK-CHI）。
　　研究二 GCK基因突變功能學(xué)研究
　　目的:
　　探討葡萄糖激酶(GCK)基因突變K90R、M197V突變引起先天性高胰島素血癥（CHI）的分子生物學(xué)機制。
　　方法:
　　構(gòu)建攜帶有谷胱甘肽S轉(zhuǎn)移酶(GST)標簽的K90R、M197V突變

5、型以及野生型GCK質(zhì)粒。體外表達和純化K90R、M197V和野生型GST-GCK重組蛋白。酶偶聯(lián)分析法進行動力學(xué)和熱穩(wěn)定性分析。
　　結(jié)果:
　　1. K90R突變與野生型GCK相比，可導(dǎo)致蛋白產(chǎn)量下降;M197V突變與野生型GCK相比，可導(dǎo)致蛋白產(chǎn)量增加。
　　2. 與野生型GCK相比，K90R和M197V突變可導(dǎo)致葡萄糖S0.5、希爾系數(shù)（h）下降以及ATP-Km水平升高;K90R突變導(dǎo)致Kcat下降;相對活性指數(shù)