巢湖藍藻藻藍蛋白提取純化及微囊藻毒素-LR去除研究.pdf

1、近些年，巢湖藍藻頻發(fā)，藍藻打撈已成為治理藍藻的重要應急措施，但打撈上岸的藍藻處置不當會造成二次污染。因此本研究以藍藻高附加值產品的開發(fā)和技術研究為目標，著重對巢湖藍藻藻藍蛋白提取純化進行研究，優(yōu)化藻藍蛋白提取純化工藝，藻藍蛋白提取伴隨著微囊藻毒素的釋放，對此本研究采用固定化微生物技術對產生的微囊藻毒素-LR進行生物化學處理。
　　本研究采用“凍融破壁——鹽析——雙水相萃取——超濾”的工藝流程提取純化藻藍蛋白，研究了凍融次數，解凍溫

2、度以及藍藻干物質的量對藻藍蛋白純度和得率的影響;研究了硫酸銨飽和度、鹽析步驟對藻藍蛋白純度和得率的影響;研究了雙水相萃取體系、聚乙二醇濃度、磷酸鉀鹽濃度對藻藍蛋白純度的影響;以及超濾分子量對藻藍蛋白純度的影響。研究結果表明:凍融破壁最佳條件為新鮮藻漿作為原料，冷凍溫度為-20℃，解凍溫度為20℃，反復凍融2次，藍藻干物質的量為1.25％，最佳鹽析條件為兩步鹽析，20％和35％硫酸銨飽和度，雙水相的最佳條件為，體系pH為6.0時，PEG4

3、000濃度為16％，KHP濃度為12％，30KDa的超濾離心管，最終得到蛋白純度高達4.8，蛋白得率為2.4％，符合國際公認的熒光試劑級藻藍蛋白純度標準(4.0)。
　　藍藻藻藍蛋白提取純化過程中，細胞內的微囊藻毒素也隨之釋放出來，本研究檢測藻藍蛋白提取純化各階段廢棄物中以及藻藍蛋白濃縮液中微囊藻毒素-LR的含量研究其釋放規(guī)律，結果表明MC-LR主要分布于超濾濾液中，其含量達到總含量的81.2％，而在藻藍蛋白濃縮液中未檢測出MC-

4、LR，所得到的的藻藍蛋白具有較高的安全性。
　　對固定化微囊藻毒素降解菌去除MC-LR進行了研究，用活性炭纖維對一株微囊藻毒素降解菌株進行了固定化，考察了不同活性炭纖維預處理方法、活性炭纖維用量、pH值、溫度以及MC-LR濃度對固定化藻毒素降解菌去除MC-LR的影響。結果表明，固定化藻毒素降解菌去除MC-LR的效率明顯高于非固定化藻毒素降解菌。藻毒素降解菌用(1+9)鹽酸預處理后的活性炭纖維作為固定化載體，其去除效果最佳。本研究得