心臟收縮力調(diào)節(jié)聯(lián)合比索洛爾對慢性心力衰竭兔心功能的影響.pdf

1、目的：通過應(yīng)用升主動脈套扎法制作慢性心力衰竭兔模型，分別給予不同處理方法，觀察心臟超聲指標、血漿BNP水平同時應(yīng)用Western blot和免疫組化法測定β1-AR密度，探討心臟收縮力調(diào)節(jié)聯(lián)合比索洛爾對慢性心力衰竭兔心功能影響，進一步探討心臟收縮力調(diào)節(jié)發(fā)揮正性肌力作用與交感神經(jīng)的關(guān)系。
　　方法：
　　選用40只新西蘭大白兔，體重在2.5-3.5kg之間，雌雄不限，均有河北醫(yī)科大學(xué)動物實驗中心提供。
　　1.CHF動物

2、模型制作：采用升主動脈縮窄致壓力負荷過重形成CHF模型。3％戊巴比妥鈉(1ml/kg)耳緣靜脈麻醉后取胸骨左旁剪斷三、四肋骨，暴露心臟，于升主動脈中段分離并結(jié)扎升主動脈，環(huán)扎穿有4號絲線的約15-20 mm聚氯乙烯管(內(nèi)徑1mm)，造成升主動脈狹窄60%。術(shù)后給予青霉素(160萬U/d，肌肉注射，共3d)，標準飼料喂養(yǎng)，自由飲水，術(shù)后12周篩選符合心衰標準的動物模型。心力衰竭模型建立成功的標準：心輸出量下降30%或（和）左室舒張末壓上升

3、至2.4Kpa(18mmHg)以上。
　　2.分組：隨機分為4組：心衰對照組(HF group)、心臟收縮力調(diào)節(jié)組(CCM group)、比索洛爾組(Drug group)、聯(lián)合處理組(Combined group)，每組10只。實驗前分別記錄各組實驗動物體重、呼吸、心率。
　　3.心臟收縮力調(diào)節(jié)：分別給予CCM組和聯(lián)合組實驗動物小兒用臨時起搏電極彎針端縫合于左心室前壁，保持裸露導(dǎo)線與心肌組織接觸，且與胸壁組織絕緣，直針端通

4、過皮下穿刺固定于頸部。于竇性心律下，通過電極頭端感知心電R波后觸發(fā)刺激儀發(fā)放絕對不應(yīng)期電刺激(2ms,7V,R波感知后延遲30ms發(fā)放)，每天刺激6小時，連續(xù)刺激4周。
　　4.觀察指標:觀察處理前后各組體重、心率、呼吸頻率。在相應(yīng)處理前后采用心臟超聲儀測定左室收縮末內(nèi)徑(Left ventricular end systolic dimension, LVESD)、左室舒張末內(nèi)徑(Left ventricular end dia

5、stolic dimension, LVEDD)、左室短軸縮短率(Left ventricular fractional shortening,LVFS)、室間隔厚度(Interventricular septal thickness, IVS)、左室后壁厚度(Left ventricular posterior wall thickness， LVPW）、左室射血分數(shù)（Left ventricular ejection fractio

6、n，LVEF）、E/A比值。
　　5.血漿BNP水平測定所有實驗動物分別于造模成功后及給予相應(yīng)處理后4周經(jīng)頸靜脈采血5ml，采用ABC-ELISA法測定血漿BNP濃度。
　　6.心肌組織β1受體蛋白表達測定完成CCM刺激及上述指標參數(shù)測定后，心腔內(nèi)注射空氣處死動物，留取心肌組織標本，分別采用蛋白印跡法(Western blot)、免疫組化法測定各組β1-AR蛋白表達。
　　結(jié)果：
　　1.實驗動物存活情況：心衰組

7、和聯(lián)合組中分別有1只實驗動物因術(shù)中出現(xiàn)氣胸死亡，藥物組和心臟收縮力調(diào)節(jié)組分別有1只實驗動物因術(shù)中出血死亡，藥物組和聯(lián)合組因操作不當分別死亡1只，聯(lián)合組1只實驗動物因術(shù)后感染死亡1只。術(shù)后存活且滿足心衰標準的動物模型共有33只：心衰組9只，心臟收縮力調(diào)節(jié)組9只，藥物組8只，聯(lián)合組7只；
　　2.各組實驗動物給予相應(yīng)處理前收集各組實驗動物一般情況、各項心臟超聲指標及血清BNP水平無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)；
　　3.對血漿BN

8、P的影響造模術(shù)后12周分別測各組血漿BNP水平無明顯差別(P＞0.05)。分別給予相應(yīng)處理后4周血漿BNP水平以聯(lián)合組降低最為顯著，其次為心臟收縮力調(diào)節(jié)組、藥物組(P＜0.05)，后兩組血漿BNP水平無明顯統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)，心衰對照組血漿BNP水平較之前無明顯變化(P＞0.05)；
　　4.對心功能的影響造模術(shù)后12周4組心臟超聲結(jié)果無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。術(shù)后12周，除對照組其余3組給予對應(yīng)處理連續(xù)4周。與對照組

9、相比，其余三組LVESD、LVEDD明顯下降，以聯(lián)合組下降最為顯著(P＜0.05)，LVEF、LVFS、E/A明顯上升，以聯(lián)合組升高最明顯(P＜0.05)，心臟收縮力調(diào)節(jié)組與比索洛爾組間各指標無明顯差異，無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。IVS、LVPW刺激前后與各組間各項指標無明顯變化(P＞0.05)；
　　5.β1-AR蛋白表達
　　5.1.蛋白印跡法(Western Blot)：與心衰對照組相比，其余三組β1-AR蛋白表達

10、升高，其中以聯(lián)合組升高最為顯著(P＜0.05)；藥物組與CCM組無明顯統(tǒng)計學(xué)差異(P＞0.05)；
　　5.2.免疫組化法:與心衰對照組相比，藥物組、心臟收縮力調(diào)節(jié)組、聯(lián)合組β1-AR蛋白表達升高，其中以聯(lián)合組升高最為顯著(P＜0.05)；藥物組與心臟收縮力調(diào)節(jié)組無明顯統(tǒng)計學(xué)差異(P＞0.05)。
　　結(jié)論：
　　1.心臟收縮力調(diào)節(jié)可改善心功能。
　　2.心臟收縮力調(diào)節(jié)聯(lián)合β1受體阻滯劑可上調(diào)心肌組織β1受體的表