天然苦味受體激動劑（青蒿琥酯）對小鼠氣道平滑肌舒張效果的評價.pdf

1、支氣管哮喘是一種慢性呼吸系統(tǒng)疾病。近年來，環(huán)境惡化導(dǎo)致哮喘發(fā)病率持續(xù)升高，嚴(yán)重威脅著人類的健康。哮喘病的基本特征是氣道高反應(yīng)性、氣道組織重構(gòu)和氣道炎癥，然而其發(fā)病機(jī)制至今仍不清楚，因此一直以來針對哮喘治療一直缺乏行之有效的方法。作為氣道組織的重要組成部分，氣道平滑肌細(xì)胞（Airway smooth muscle cells，ASMCs）在哮喘的病理過程中起到了重要的作用，其結(jié)構(gòu)改變致使功能發(fā)生變化從而導(dǎo)致氣道平滑肌的生物力學(xué)行為異常，在

2、受到外部過敏原等刺激時，發(fā)生氣道高反性（AHR），從而引起氣道持續(xù)性過度收縮、變窄，引起呼吸困難等功能阻礙。因此，對氣道平滑肌收縮功能變異的研究正成為目前主流研究方面。
　　研究發(fā)現(xiàn)苦味受體（Bitter taste receptors，TAS2Rs)也存在于氣道平滑肌，并且苦味受體激動劑與氣道平滑肌上的苦味受體結(jié)合，可使氣道平滑肌舒張，因此苦味受體激動劑可作為治療哮喘的潛在藥物。
　　青蒿琥酯是一種具有抗炎作用的苦味物質(zhì)，

3、對于以氣道炎癥和氣道高反應(yīng)性為基本特征的哮喘，可能是一種潛在的治療藥物。
　　為了評價青蒿琥酯等苦味受體激動劑對氣道平滑肌的舒張效果，選用原代培養(yǎng)獲得的BALB/c小鼠氣道平滑肌細(xì)胞，觀察給藥之后細(xì)胞力學(xué)行為和胞內(nèi)鈣離子濃度（Intracellular calcium，[Ca2+]i）的變化；通過檢測正常BALB/c小鼠給藥之后氣道阻力的變化，將青蒿琥酯的舒張效果與沙丁胺醇和奎寧進(jìn)行比較；建立由卵清蛋白（Ovalbumin，OVA

4、）致敏的小鼠哮喘模型，通過比較青蒿琥酯對正常組和哮喘模型組小鼠氣道阻力的影響，以此評價青蒿琥酯對哮喘模型小鼠氣道平滑肌的舒張效果。主要研究內(nèi)容和結(jié)果如下：
　?。?）運(yùn)用組織塊貼壁和酶消化相結(jié)合的方法，并且經(jīng)過鑒定，成功獲取BALB/c小鼠氣道平滑肌細(xì)胞。
　　（2）通過傅里葉變換牽引力顯微術(shù)（FTTC），檢測細(xì)胞牽張力變化。結(jié)果顯示，隨著青蒿琥酯濃度的升高，細(xì)胞的牽張力越來越小，對ASMCs舒張效果越強(qiáng)。
　　（3）

5、用Flou-4 AM指示細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度變化。結(jié)果顯示，隨著青蒿琥酯濃度的升高，[Ca2+]i也隨之升高，與奎寧相比，青蒿琥酯引起的[Ca2+]i更高，持續(xù)時間更長。為后續(xù)研究青蒿琥酯對氣道平滑肌舒張的作用機(jī)制提供指導(dǎo)。
　?。?）不同藥物刺激正常小鼠后，其氣道阻力的變化可通過小動物肺功能測量儀來檢測。結(jié)果顯示，隨著青蒿琥酯濃度的升高，小鼠氣道阻力降低越明顯，即舒張效果越好。與沙丁胺醇、奎寧相比，青蒿琥酯的舒張效果可與其相當(dāng)，可將

6、小鼠氣道阻力由基線的4-5倍，降至2-3倍之間。
　　（5）建立OVA誘導(dǎo)小鼠哮喘模型，檢測青蒿琥酯對哮喘模型小鼠氣道阻力的變化。結(jié)果顯示，我們成功建立了小鼠哮喘模型；青蒿琥酯對于哮喘模型小鼠氣道平滑肌的舒張作用不如對正常小鼠的好，但是仍有一定的舒張作用。
　　綜上所述，本課題從細(xì)胞水平和動物水平兩個方面，對青蒿琥酯等苦味受體激動劑對氣道平滑肌的舒張效果進(jìn)行評價，結(jié)果顯示，青蒿琥酯能有效舒張氣道平滑肌，是一種潛在的治療哮喘藥