加味升降散對(duì)膜性腎病大鼠的腎保護(hù)作用及對(duì)腎組織CXCL16、FcRn表達(dá)的影響.pdf

1、目的：本研究運(yùn)用陽(yáng)離子化牛血清白蛋白(C-BSA)尾靜脈注射的方法成功建立膜性腎病(MN)大鼠模型，分組后分別給予不同劑量的加味升降散及鹽酸貝那普利片進(jìn)行干預(yù)，通過(guò)測(cè)定大鼠血肌酐、尿素氮、24小時(shí)尿蛋白定量、血白蛋白等生化指標(biāo)，通過(guò)光鏡、電鏡、免疫熒光觀測(cè)大鼠腎臟病理變化，免疫組化檢測(cè)CXC趨化因子配體16(CXCL16)、新生兒Fc受體(FcRn)蛋白及real-time PCR法檢測(cè)CXCL16、FcRn在腎臟中的表達(dá)，來(lái)探討加味升

2、降散對(duì)膜性腎病大鼠的腎保護(hù)作用及對(duì)腎組織CXCL16、FcRn表達(dá)的影響，從而為臨床用藥提供理論依據(jù)。
　　方法：選取清潔級(jí)健康SD大鼠60只，普通飼料喂養(yǎng)一周，待大鼠習(xí)慣其周圍環(huán)境后，測(cè)定其24小時(shí)尿蛋白定量均小于5mg，隨機(jī)分為10只、50只，依次為正常組(NG)及造模組。造模組預(yù)免疫1周后，予陽(yáng)離子化牛血清白蛋白尾靜脈注射，每周三次，共四周。測(cè)定24小時(shí)尿蛋白定量，確定模型復(fù)制成功后，隨機(jī)分為模型組(MG)、西藥組(BG)、

3、升降散低劑量組(SLG)、升降散中劑量組(SMG)、升降散高劑量組(SHG)，每組各10只。西藥組給予鹽酸貝那普利(10mg/kg/d)研磨溶于3ml生理鹽水灌胃，升降散低、中、高劑量組分別給予加味升降散(4.53g/kg/d、9.06g/kg/d、18.12g/kg/d)溶于3ml生理鹽水灌胃，模型組和正常組給予同等劑量的生理鹽水灌胃。灌胃4周后，測(cè)定各組大鼠24小時(shí)尿蛋白定量(24h-UTP)，剪開(kāi)腹壁，于股動(dòng)脈取血，測(cè)定血尿素氮(

4、BUN)、血肌酐(Scr)、血總蛋白(TP)、血白蛋白(ALB)、血總膽固醇(TC)、血甘油三酯(TG)等生化指標(biāo)，留取新鮮腎臟標(biāo)本，通過(guò)光鏡、電鏡、免疫熒光觀測(cè)大鼠腎臟病理變化，免疫組化檢測(cè)CXCL16、FcRn蛋白及real-time PCR法檢測(cè)CXCL16 mRNA、FcRn mRNA在腎臟中的表達(dá)。
　　結(jié)果：
　　1.一般情況:正常組大鼠精神良好、反應(yīng)敏捷、毛發(fā)有光澤。模型復(fù)制成功后，各造模組大鼠出現(xiàn)精神萎靡、反

5、應(yīng)遲鈍、毛發(fā)欠光澤、攝食減少等，甚至出現(xiàn)腹部水腫。給藥后，各治療組大鼠情況較前有所好轉(zhuǎn)，模型組未見(jiàn)明顯改善。
　　2.各組大鼠24小時(shí)尿蛋白定量比較:模型復(fù)制成功后，各造模組24h-UTP均明顯升高，較正常組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。灌胃4周后，各治療組24h-UTP較模型組顯著降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；與升降散低劑量組相比較，西藥對(duì)照組、升降散中劑量組、升降散高劑量組24h-UTP明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；西藥對(duì)照組與升降散中劑量組

6、、升降散高劑量組之間進(jìn)行兩兩比較，未見(jiàn)明顯差異。
　　3.各組大鼠血總蛋白、血白蛋白、血總膽固醇、血甘油三酯比較:模型復(fù)制成功后，與正常組相比，各造模組TP和ALB均明顯降低、TC和TG均明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。灌胃4周后，與模型組相比，各治療組TP和ALB均顯著升高，TC和TG顯著降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；與升降散低劑量組相比較，西藥對(duì)照組、升降散中劑量組、升降散高劑量組TP和ALB明顯升高、TC和TG明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意

7、義；西藥對(duì)照組與升降散中劑量組、升降散高劑量組之間進(jìn)行兩兩比較，TP、ALB、TC、TG均未見(jiàn)明顯差異。
　　4.各組大鼠血肌酐、血尿素氮比較:各組大鼠之間BUN、Scr相比無(wú)明顯變化，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
　　5.各組大鼠腎臟病理變化:正常組大鼠腎小球結(jié)構(gòu)未見(jiàn)明顯異常；模型組大鼠光鏡下腎小球毛細(xì)血管襻基膜不規(guī)則增厚；電鏡下腎小球基底膜不規(guī)則增厚，上皮下可見(jiàn)較多的電子致密物沉積，大量足突融合，釘突形成；免疫熒光

8、可見(jiàn)lgG和C3沿著毛細(xì)血管袢及系膜區(qū)呈顆粒狀彌漫性沉積。各治療組與模型組比較，基底膜增厚程度較輕，上皮下電子致密物沉積較少，其中升降散低劑量組基底膜增厚程度較模型組輕，較其他治療組重，其他治療組相比未見(jiàn)明顯差異。
　　6.免疫組化檢測(cè)CXCL16、FcRn蛋白在腎臟的表達(dá):CXCL16在正常組及各造模組中均有不同程度的表達(dá)。與正常組相比，各造模組CXCL16的表達(dá)水平均增強(qiáng)；與模型組相比，各治療組CXCL16的表達(dá)水平均有減弱；

9、與升降散低劑量組相比，西藥對(duì)照組、升降散中劑量組、升降散高劑量組CXCL16的表達(dá)水平均減弱；西藥對(duì)照組、升降散中劑量組、升降散高劑量組兩兩比較， CXCL16的表達(dá)水平未見(jiàn)明顯變化，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　FcRn在正常組及各造模組中均有不同程度的表達(dá)。與正常組相比，各造模組FcRn的表達(dá)水平均增強(qiáng)；與模型組相比，各治療組FcRn的表達(dá)水平均有減弱；與升降散低劑量組相比，西藥對(duì)照組、升降散中劑量組、升降散高劑量組FcRn的表達(dá)水

10、平均減弱；西藥對(duì)照組、升降散中劑量組、升降散高劑量組兩兩比較，F(xiàn)cRn的表達(dá)水平未見(jiàn)明顯變化，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　7 Real-time PCR法檢測(cè)CXCL16 mRNA、FcRn mRNA在腎臟的表達(dá):各造模組與正常組相比，CXCL16 mRNA、FcRn mRNA的表達(dá)水平均有上調(diào)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；各治療組與模型組相比，CXCL16 mRNA、FcRn mRNA的表達(dá)水平均有下調(diào)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；與升降散低劑量組相比

11、，西藥對(duì)照組、升降散中劑量組、升降散高劑量組CXCL16 mRNA、FcRn mRNA的表達(dá)水平均有下調(diào)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；西藥對(duì)照組、升降散中劑量組、升降散高劑量組兩兩比較， CXCL16 mRNA、FcRn mRNA的表達(dá)水平未見(jiàn)明顯變化，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)論：
　　1.加味升降散可明顯升高膜性腎病大鼠的TP、ALB水平，顯著降低膜性腎病大鼠的24h-UTP、TC、TG水平。
　　2.加味升降散可能具有抑制