RACK1與NF-κB信號(hào)通路相關(guān)蛋白在幽門螺桿菌感染相關(guān)胃黏膜病變中的表達(dá).pdf

1、背景和目的：
　　胃癌是世界第五大最常見的惡性腫瘤,在腫瘤相關(guān)疾病死亡原因中高居第三位，每年新增病例近100萬(wàn)。由此帶來(lái)的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)70％落在發(fā)展中國(guó)家，尤其是亞洲地區(qū)。幽門螺桿菌（Helicobacter pylori，Hp）感染是胃癌發(fā)生最主要的危險(xiǎn)因素，目前大多數(shù)學(xué)者認(rèn)為Hp感染在經(jīng)典胃黏膜癌變過(guò)程，即非萎縮性胃炎-腸上皮化生-異型增生-胃癌過(guò)程中起著始發(fā)和推動(dòng)作用，但Hp感染致病確切機(jī)制目前仍不清楚。大量相關(guān)研究表明，Hp感

2、染后核轉(zhuǎn)錄因子κB（Nuclear factor-kappa B,NF-κB）信號(hào)通路呈激活狀態(tài)，NF-κB的活化與Hp相關(guān)胃炎、胃潰瘍及胃癌的發(fā)生發(fā)展及生存預(yù)后均密切相關(guān)。NF-κB是一種多功能核轉(zhuǎn)錄因子，靜息狀態(tài)時(shí)，NF-κB二聚體p50/p65與其抑制蛋白(inhibitor of nuclear factor-kappa B,IκB)結(jié)合形成復(fù)合體，以無(wú)活性狀態(tài)存在于細(xì)胞質(zhì)中。受到外界刺激后，IκB被磷酸化，隨后泛素化被蛋白酶體

3、降解，與NF-κB解聚后暴露出NF-κB的核定位序列（nuclear localization sequence，NLS）從而解除抑制作用，隨后p65從胞漿中轉(zhuǎn)入胞核中調(diào)控多種基因轉(zhuǎn)錄，進(jìn)而在炎癥、免疫、腫瘤中發(fā)揮重要作用。因此，闡明Hp感染后NF-κB具體活化及調(diào)控機(jī)制可為臨床胃癌的防治提供新的思路。
　　RACK1是色氨酸-天冬氨酸(tryptophan-aspartic acid40，WD40)重復(fù)序列家族的成員之一，由于該

4、特殊結(jié)構(gòu)，可與胞內(nèi)多種信號(hào)相關(guān)蛋白如激酶、膜受體、離子通道、凋亡相關(guān)分子及核糖體等結(jié)合，從而在炎癥、細(xì)胞遷移、凋亡及腫瘤發(fā)生中發(fā)揮重要作用。最新研究發(fā)現(xiàn)RACK1是一種新的NF-κB信號(hào)通路負(fù)性調(diào)控因子，并且早在2001年已被證實(shí)能夠與Hp毒力因子VacA相互作用。因此，我們推測(cè)RACK1可能在Hp感染致NF-κB信號(hào)通路的激活中發(fā)揮一定作用。為此，針對(duì)我們提出的假設(shè)，本課題采用免疫組織化學(xué)檢測(cè)人體胃黏膜癌變組織，旨在初步探討RACK1

5、與NF-κB信號(hào)通路相關(guān)蛋白在Hp相關(guān)胃黏膜病變中表達(dá)變化及其相關(guān)性，并進(jìn)一步在細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中驗(yàn)證Hp感染后RACK1與NF-κB信號(hào)通路相關(guān)蛋白變化趨勢(shì)與組織中是否一致。如實(shí)驗(yàn)達(dá)到預(yù)期，可為進(jìn)一步闡明RACK1在Hp感染致NF-κB激活中的作用及機(jī)制提供理論基礎(chǔ)。
　　方法：
　　1.收集慢性非萎縮性胃炎、腸上皮化生、異型增生、早期胃癌和進(jìn)展期胃癌病理標(biāo)本（每組40例，共200例，前三組中Hp陽(yáng)性與陰性各20例），免疫組織化學(xué)

6、方法檢測(cè)RACK1、IκBα和p-IκBα蛋白的表達(dá)。
　　2. ATCC43504 Hp菌株（MOI=50：1）作用GES-1細(xì)胞后，分別于0h、30min、45min、1h、3h和6h不同時(shí)間點(diǎn)，采用Western blot方法檢測(cè)RACK1、p65、p-p65（Ser276）及p-p65（Ser536）蛋白的表達(dá)情況。
　　結(jié)果：
　　1.人胃黏膜癌變過(guò)程中RACK1、IκBα和p-IκBα的表達(dá)情況及其相關(guān)性分

7、析
　　（1）RACK1表達(dá)：在慢性非萎縮性胃炎組表達(dá)最高，隨著胃黏膜病變的進(jìn)展呈下降趨勢(shì)（p<0.01），在早期胃癌組和進(jìn)展期胃癌組較低水平表達(dá)，兩組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（75%vs62.5%，p>0.05）。進(jìn)一步將慢性非萎縮性胃炎組、癌前病變組（腸上皮化生和異型增生）分為Hp陽(yáng)性組和Hp陰性組，Hp陽(yáng)性組與Hp陰性組各病變階段RACK1表達(dá)均呈下降趨勢(shì)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（100%vs87.5%；90%vs90%，p<0.05）

8、。
　?。?）IκBα表達(dá)：在慢性非萎縮性胃炎組表達(dá)最高，隨著胃黏膜病變的進(jìn)展呈下降趨勢(shì)（p<0.01），在早期胃癌組和進(jìn)展期胃癌組表達(dá)較低，兩組間無(wú)顯著差異（47.5%vs45%，p>0.05）。將慢性非萎縮性胃炎組、癌前病變組（腸上皮化生和異型增生）分為Hp陽(yáng)性組和Hp陰性組，Hp陽(yáng)性組IκBα蛋白各病變階段間表達(dá)均呈下降趨勢(shì)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（100%vs72.5%，p<0.01）。而Hp陰性組IκBα表達(dá)各階段無(wú)明顯差異（

9、85%vs67.5%，p>0.05）。
　　p-IκBα表達(dá)：在慢性非萎縮性胃炎組表達(dá)最低，隨胃黏膜病變進(jìn)展呈上升趨勢(shì)（p<0.01），在早期胃癌組和進(jìn)展期胃癌組較高水平表達(dá)，兩組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（62.5%vs45%，p>0.05）。將慢性非萎縮性胃炎組、癌前病變組（腸上皮化生和異型增生）分為Hp陽(yáng)性組和Hp陰性組，Hp陽(yáng)性組各病變階段p-IκBα無(wú)顯著性差異（45%vs75%，p>0.05），而Hp陰性組中癌前病變組p-Iκ

10、Bα蛋白表達(dá)高于慢性非萎縮性胃炎組，有顯著差異（40%vs77.5%，p<0.01）。
　?。?）與Hp感染的關(guān)系：將慢性非萎縮性胃炎組、癌前病變組各自分為Hp陽(yáng)性和陰性組，進(jìn)行組間比較。結(jié)果顯示在胃黏膜病變?cè)缙陔A段，Hp陽(yáng)性組RACK1顯著高于Hp陰性組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（100%vs90%；87.5 vs90%，p<0.05），而Hp陽(yáng)性和陰性組間IκBα與p-IκBα蛋白表達(dá)無(wú)顯著性差異（p>0.05）。
　?。?）胃

11、癌組織中RACK1與IκBα、p-IκBα表達(dá)的關(guān)系：胃癌組織中RACK1與IκBα蛋白表達(dá)正相關(guān)（p<0.01），與p-IκBα負(fù)相關(guān)，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（p<0.01）。
　　2. Hp作用GES-1后RACK1與NF-κB信號(hào)通路相關(guān)蛋白表達(dá)情況
　　Hp活菌（MOI=50：1）作用GES-1細(xì)胞后，RACK1表達(dá)量在作用后30min開始升高，3h達(dá)到高峰（p<0.01），6h開始下降（p<0.05）。NF-κB信號(hào)通

12、路相關(guān)蛋白中p65表達(dá)無(wú)明顯變化（p>0.05），而p-p65(Ser276)蛋白表達(dá)水平在各時(shí)間點(diǎn)均明顯升高，30min開始升高，3h達(dá)到高峰（p<0.01），6h內(nèi)均高于0h（p<0.05），p-p65(Ser536)表達(dá)水平在3h顯著升高（p<0.01），作用6h時(shí)仍高于0h（p<0.05），
　　結(jié)論：
　　1. RACK1表達(dá)下調(diào)和NF-κB信號(hào)通路活化可能參與了胃黏膜癌變過(guò)程。
　　2. Hp感染相關(guān)胃粘膜