電針調(diào)控下丘腦SIRT1-FoxO1及氧化應(yīng)激改善胰島素抵抗肥胖的機制研究.pdf

1、目的：
　　胰島素抵抗與肥胖、2型糖尿病、多囊卵巢綜合征、代謝紊亂、高血壓病等息息相關(guān)，胰島素抵抗是肥胖病患者發(fā)展成2型糖尿病的關(guān)鍵病理基礎(chǔ)。對胰島素抵抗及肥胖進行早期干預(yù)，對于防止其發(fā)展成為2型糖尿病及造成心腦血管損害具有重要意義。本實驗擬采用“標本配穴”電針法，對胰島素抵抗肥胖模型Wistar大鼠進行干預(yù)，以改善下丘腦氧化應(yīng)激反應(yīng)為切入點，觀察電針對下丘腦 SIRT1、FoxO1、氧化應(yīng)激的影響，以期為臨床運用電針防治胰島素抵

2、抗肥胖及其相關(guān)疾病提供實驗依據(jù)。
　　方法：
　　將70只8周齡的SPF級Wistar雄性大鼠，適應(yīng)性喂養(yǎng)一周后，隨機分為正常組（n=10）和高脂喂養(yǎng)組(n=60)，分別喂普通飼料和高脂飼料，8周后，正常組隨機抽取3只，模型組隨機抽取18只，行高胰島素-正葡萄糖鉗夾術(shù)，評定胰島素抵抗模型，同時測量每只大鼠體重、肛鼻長，計算Lee’s指數(shù)，評定肥胖模型。造模成功后，將高脂喂養(yǎng)組大鼠隨機分為模型組、假手術(shù)組、電針組、針+抑組、抑

3、制劑組、激動劑組六個組，每組7只。正常組給予普通飼料喂養(yǎng)不給予任何處理；模型組高脂飼料喂養(yǎng)，不給予任何處理；電針組高脂飼料喂養(yǎng)，給予電針治療，取穴中脘、關(guān)元、后三里、豐隆，針刺后連接韓式電針儀，連續(xù)波，頻率2Hz，強度1mA，隔天治療一次，共治療8周，其中后三里、豐隆左右交替使用；假手術(shù)組高脂飼料喂養(yǎng)，第三腦室內(nèi)置管，并注射人工腦脊液；針+抑組高脂飼料喂養(yǎng)，第三腦室內(nèi)置管，并注射SIRT1特異性拮抗劑EX-527，同時給予電針治療，電針

4、治療同電針組；抑制劑組高脂飼料喂養(yǎng)，第三腦室內(nèi)置管并注射SIRT1特異性拮抗劑EX-527；激動劑組高脂飼料喂養(yǎng)，第三腦室內(nèi)置管并注射 SIRT1特異性激動劑SRT1720。干預(yù)6周后，測定各組大鼠的IPGTT、IPITT；干預(yù)8周后，測定各組大鼠的體重；然后每組各抽取3只行高胰島素-正葡萄糖鉗夾術(shù)，測定GIR；剩余大鼠腹主動脈取血用生化試劑盒檢測TC、TG、FFA含量，用ELISA試劑盒檢測Leptin、Resistin含量，另外取大

5、鼠下丘腦組織用Western Blotting法檢測SIRT1、FoxO1、CAT蛋白表達水平；用RT-PCR法檢測SIRT1、FoxO1、CATmRNA的表達水平；并通過DCFH-DA法檢測大鼠下丘腦ROS的含量、黃嘌呤氧化酶法測定SOD活性、比色法測定MDA含量，并對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學(xué)分析。
　　結(jié)果：
　　1.高脂喂養(yǎng)8周對大鼠體重、Lee,s指數(shù)、GIR的影響
　　經(jīng)過8周喂養(yǎng)后，高脂喂養(yǎng)組大鼠體重、Lee,s指數(shù)

6、顯著高于正常組（P<0.01）；高脂喂養(yǎng)組大鼠GIR顯著低于正常組（P<0.01）。
　　2.電針對胰島素抵抗肥胖大鼠體重，TC、TG、FFA含量，Leptin、Resistin含量，胰島素敏感性的影響
　　與模型組大鼠體重相比，電針組、激動劑組大鼠體重顯著下降(P<0.01),抑制劑組大鼠體重顯著上升(P<0.01)；與針+抑組相比，抑制劑組大鼠體重上升(P<0.05),電針組大鼠體重?zé)o差異(P>0.05)；電針組與激動劑

7、組相比無差異(P>0.05)。
　　與模型組大鼠TC、TG、FFA含量相比，電針組、激動劑組TC、TG、FFA含量均顯著降低(P<0.01)，抑制劑組 TC、TG、FFA含量均顯著升高(P<0.01)；與電針組相比，針+抑組、抑制劑組 TG、FFA含量顯著上升（P<0.01）。
　　與模型組大鼠Leptin、Resistin含量相比，電針組、激動劑組Leptin、Resistin含量顯著降低(P<0.01），抑制劑組 Lep

8、tin含量顯著升高（P<0.01）。
　　與模型組大鼠IPITT、IPGTT、GIR相比，電針組、激動劑組IPITT、IPGTT、GIR則顯著增強（P<0.01），而抑制劑組IPITT、IPGTT、GIR則明顯受損（P<0.05）；與針+抑組相比，抑制劑組IPITT、IPGTT、GIR顯著受損（P<0.01）。
　　3.電針對胰島素抵抗肥胖大鼠下丘腦SIRT1、FoxO1、CAT蛋白及mRNA表達的影響
　　與正常組相

9、比，其余六組的SIRT1、FoxO1、CAT蛋白及mRNA表達均下降（P<0.05）；與模型組相比，電針組、激動劑組 SIRT1、FoxO1、CAT蛋白及 mRNA表達升高（P<0.05），抑制劑組 SIRT1、FoxO1、CAT蛋白及mRNA表達下降（P<0.05）；與電針組相比，針+抑組 SIRT1、FoxO1、CAT蛋白及mRNA均下降（P<0.05）。
　　4.電針對胰島素抵抗肥胖大鼠下丘腦氧化應(yīng)激的影響
　　與正常

10、組相比，其余六組的ROS、MDA含量均上升，SOD活性均下降（P<0.01）；與模型組相比，電針組、激動劑組ROS、MDA含量顯著降低， SOD活性顯著增強（P<0.01），而抑制劑組ROS、MDA含量則顯著升高，SOD活性顯著下降（P<0.01）；與電針組相比，針+抑組ROS、MDA含量均顯著上升，SOD活性均顯著下降（P<0.01）。
　　結(jié)論：
　　1.電針能夠降低胰島素抵抗肥胖大鼠的體重，降低胰島素抵抗肥胖大鼠TC、

11、TG、FFA含量、降低Leptin、Resistin含量，同時還能夠提高胰島素抵抗肥胖大鼠的胰島素敏感性，而且電針的這種調(diào)節(jié)作用與SIRT1激動劑的調(diào)節(jié)作用類似。
　　2.電針能夠使胰島素抵抗肥胖大鼠下丘腦SIRT1、FoxO1、CAT蛋白及mRNA表達水平增加。SIRT1激動劑組SIRT1、FoxO1、CAT蛋白及mRNA表達的增加，SIRT1抑制劑組SIRT1、FoxO1、CAT蛋白及mRNA表達的減少,電針+抑制劑組SIRT