奶粉中肉毒梭菌的檢測(cè).pdf

1、肉毒梭菌歸屬于厭氧性梭狀芽孢桿菌屬，革蘭氏染色為陽(yáng)性大桿菌（約為4×1μm），多單個(gè)存在，菌體兩側(cè)平行，兩端鈍園，呈直桿狀或稍彎曲，芽孢位于次級(jí)端，大于菌體寬度，呈卵圓形，使菌體呈匙形或網(wǎng)球拍狀。有4～8根周生鞭毛，運(yùn)動(dòng)遲緩，無(wú)莢膜。
　　肉毒梭菌能產(chǎn)生肉毒毒素（外毒素），是一種神經(jīng)毒素，能導(dǎo)致人體死亡。肉毒毒素不耐熱，沸水煮1min或75℃加熱5～10min毒素就能被完全破壞。毒素被釋放到細(xì)菌體外后，在適應(yīng)的條件下，毒性能被胰酶

2、激活而引起人體中毒。肉毒毒性極強(qiáng)，比氰化鉀毒性還強(qiáng)萬(wàn)倍。
　　對(duì)于食品或者是環(huán)境中肉毒梭菌的檢測(cè)都需要進(jìn)行增菌培養(yǎng)，目的是使其達(dá)到一定含量以便檢出，常用的前增菌液有皰肉培養(yǎng)基和胰蛋白酶胰蛋白胨葡萄糖酵母膏(TPGYT)培養(yǎng)基，用以識(shí)別肉毒梭菌的培養(yǎng)基有卵黃瓊脂培養(yǎng)基和血平板。肉毒梭菌的快速檢測(cè)方法有16SrRNA基因比對(duì)法，特異性基因RCR擴(kuò)增檢測(cè)法。
　　通過(guò)傳統(tǒng)檢測(cè)培養(yǎng)獲得疑似肉毒梭菌的單個(gè)菌落，將單個(gè)菌落進(jìn)行增菌培養(yǎng)后

3、獲得大量菌落，便于進(jìn)一步進(jìn)行快速檢測(cè)，從而確證可疑菌是否為肉毒梭菌。通過(guò)16SrRNA基因比對(duì)法獲得可疑菌可能是何種菌種的范圍，給定了檢測(cè)方向，大大節(jié)約了試驗(yàn)時(shí)間。所有可疑菌16SrRNA基因比對(duì)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，不僅僅只有肉毒梭菌。有些可疑菌的比對(duì)結(jié)果是蠟樣芽孢桿菌、蘇云金芽孢桿菌、假蕈狀芽孢桿菌和炭疽芽孢桿菌，有些是乳桿菌，還有些是地衣芽孢桿菌和產(chǎn)氣莢膜梭菌。16SrRNA基因比對(duì)結(jié)果給出的只是與可疑菌親緣較近的菌株名稱，是否是還得需要進(jìn)一

4、步驗(yàn)證。
　　針對(duì)16SrRNA基因比對(duì)結(jié)果給出的范圍，選擇相應(yīng)的RCR方法進(jìn)行驗(yàn)證，必要時(shí)進(jìn)行全套鑒別生化試驗(yàn)。最后驗(yàn)證結(jié)果與16SrRNA基因比對(duì)結(jié)果基本一致，試驗(yàn)樣品最后分別檢出生孢梭菌、蠟樣芽孢桿菌和乳桿菌。
　　本論文的研究是通過(guò)大量抽檢樣品，探索肉毒梭菌及其毒素快速檢測(cè)方法(PCR、16SrRNA應(yīng)用)的有效性。最后還通過(guò)最終檢測(cè)數(shù)據(jù)，得出奶粉易受哪些非肉毒梭菌的同屬于厭氧芽孢菌屬的其他菌的污染，以及討論這些非肉