IGFBPrP1對大鼠和比格犬腎組織的影響及意義.pdf

1、背景：胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白相關(guān)蛋白1(insulin-like growth factor binding protein-related protein1，IGFBPrP1）是一種分泌性蛋白，具有細(xì)胞增殖、分化、衰老、凋亡及血管形成等多種生物學(xué)活性，廣泛分布于各種正常組織中。轉(zhuǎn)化生長因子β1（transforming growth factor beta1，TGFβ1）是一種具有多功能和多向作用的非組織特異性胞因子，是目前公認(rèn)導(dǎo)致

2、組織器官纖維化病變的一種關(guān)鍵因子，尤其對肝、腎組織具有重要作用。
　　目的：探索IGFBPrP1是否對SD大鼠和比格犬腎組織具有作用及部分作用機(jī)制。
　　方法：①健康雄性SD大鼠60只，隨機(jī)分為3組：A組（n=10）：經(jīng)尾靜脈注射生理鹽水；B組（n=25）：經(jīng)尾靜脈注射腺病毒攜帶的增強(qiáng)型綠色熒光蛋白（Ad-EGFP）4×109 pfu/只；C組（n=25）：經(jīng)尾靜脈注射腺病毒攜帶的IGFBPrP1（Ad-IGFBPrP1）4

3、×109 pfu/只；各組分別于注射后1、2、4、6、9w留取腎組織，經(jīng)10％中性福爾馬林固定后待測。②健康雄性比格犬18只，隨機(jī)分為3組：D組（n=6）：正常飲食飼養(yǎng)；E組（n=6）：皮下注射TAA12 mg/kg，每周2次；F組（n=6）：皮下注射TAA12 mg/kg，每周2次，5w起協(xié)同注射IGFBPrP1抗體5μg/kg，每周1次；各組分別于12w末留取腎組織，經(jīng)10%中性福爾馬林固定后待測。HE染色和Sirius red染色

4、觀察SD大鼠和比格犬腎組織形態(tài)結(jié)構(gòu)病理改變和膠原纖維沉積情況；免疫組織化學(xué)染色檢測SD大鼠腎組織IGFBPrP1、白胞介素1β（IL-1β）、TGFβ1、纖維連接蛋白（FN）以及比格犬腎組織IGFBPrP1、IL-1β、FN的分布和表達(dá)情況。
　　結(jié)果：⑴HE染色：A組和B組腎小球和腎小管結(jié)構(gòu)完整；C組腺病毒轉(zhuǎn)染后1w和2w出現(xiàn)腎小管上皮細(xì)胞腫脹，管腔擴(kuò)張，伴炎癥細(xì)胞浸潤；4w管腔內(nèi)出現(xiàn)透明管型，6w管腔內(nèi)存在大量透明管型，9w腎

5、間質(zhì)內(nèi)可見纖維增生，個別腎小球甚至出現(xiàn)萎縮壞死。⑵Sirius red染色：A組和B組均僅在腎小囊壁層可見少量紅色膠原纖維；C組除腎小囊壁層外，腎小球、腎間質(zhì)內(nèi)紅色膠原纖維沉積逐漸增多，9w時明顯增多。與A組、B組和C組1、2、4、6w相比，C組9w膠原纖維含量明顯升高（0.28±0.10），差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。⑶IGFBPrP1：A組和B組表達(dá)微弱；C組從1w開始，腎小球、腎小管上皮細(xì)胞胞漿陽性表達(dá)顆粒增多，轉(zhuǎn)染2w后

6、達(dá)高峰（4.55±0.78），4w后逐漸減弱，9w表達(dá)甚少。⑷IL-1β：A組和B組幾乎無表達(dá)；C組1w腎小球、少量腎小管上皮細(xì)胞胞漿弱陽性表達(dá)，隨轉(zhuǎn)染時間延長，陽性表達(dá)的范圍和程度均增加，6w時達(dá)到高峰（1.93±0.15），9w較6w表達(dá)明顯減弱。⑸TGFβ1：A組和B組表達(dá)量極少；C組位于腎小球、腎小管上皮細(xì)胞胞漿的陽性染色顆粒自轉(zhuǎn)染后1w開始增多，2w時明顯增多，9w時達(dá)高峰（3.64±0.71）。⑹FN：A組和B組極少表達(dá)；C

7、組1、2、4、6w腎小球、腎間質(zhì)弱陽性表達(dá)，9w時陽性表達(dá)明顯增強(qiáng)（0.60±0.07）。⑺IGFBPrP1：D組微量表達(dá)；E組在腎小管上皮細(xì)胞胞漿內(nèi)陽性表達(dá)明顯增強(qiáng)；F組較E組表達(dá)減弱。⑻IL-1β：D組幾乎無表達(dá)；E組腎小球、腎小管上皮細(xì)胞及腎間質(zhì)內(nèi)棕褐色顆粒增多；F組呈淺棕色顆粒。⑼FN：D組微量表達(dá)；E組腎間質(zhì)出現(xiàn)棕褐色染色顆粒；F組染色呈淺棕色。以上指標(biāo)統(tǒng)計分析結(jié)果示：E組的IGFBPrP1、IL-1β、FN陽性表達(dá)均顯著高于

8、D組（0.90±0.12 vs3.99±0.59，P<0.01；0.24±0.02 vs1.28±0.13，P<0.05；0.60±0.07 vs0.88±0.10，P<0.01）；F組的IGFBPrP1、IL-1β、FN表達(dá)低于E組（2.15±0.11 vs3.99±0.59，P<0.01；0.47±0.03 vs1.28±0.13，P<0.01；0.71±0.05 vs0.88±0.10，P<0.01），但仍高于D組（0.90±0.