鈰配合物定點(diǎn)水解切斷DNA的研究.pdf

1、在生理?xiàng)l件下能高效水解切斷核酸的人工內(nèi)切酶的研制具有十分重要的研究意義和應(yīng)用價(jià)值。國內(nèi)外的研究報(bào)道已經(jīng)表明了金屬離子及其配合物對核酸的磷酸二酯鍵具有水解切斷作用，但對它們的研究還剛剛處于起步階段，還有許多值得深入探討的地方。本論文系統(tǒng)研究了寡聚脫氧核苷酸在電極表面的吸附狀態(tài)的變化以及寡聚脫氧核苷酸鈰配合物人工內(nèi)切酶對DNA的定點(diǎn)水解切斷作用。由于眾多生物化學(xué)變化都發(fā)生在荷電界面上，因此研究核酸在帶電界面上的吸附行為是非常有必要的。本文首

2、先以13個(gè)堿基長短的DNA片斷和26個(gè)堿基長短的DNA片斷為研究對象，運(yùn)用原位電化學(xué)表面增強(qiáng)拉曼光譜技術(shù)研究了13-mersDNA和26-mersDNA在帶電銀電極表面上的吸附狀態(tài)。測定了13-mersDNA和26-mersDNA在銀電極表面上的增強(qiáng)拉曼光譜，研究了電位變化對DNA分子的表面增強(qiáng)拉曼光譜變化的影響，并推測了這兩種生物分子在銀電極表面的吸附狀態(tài)及其隨電位變化的情況；比較了不同鏈長DNA的表面增強(qiáng)拉曼光譜隨電位變化而響應(yīng)的速

3、率，并推測了其原因。我們所設(shè)計(jì)的人工內(nèi)切酶包含兩個(gè)部分，一是識別部分，二是切割部分。為了使人工內(nèi)切酶能夠定點(diǎn)切斷DNA，首先必須要使其識別目標(biāo)DNA并牢固地結(jié)合到目標(biāo)DNA上。我們所設(shè)計(jì)的人工內(nèi)切酶的識別部分為與目標(biāo)DNA堿基互補(bǔ)的一個(gè)DNA片斷。為了研究其與目標(biāo)DNA的作用，我們采用了離子熒光探針法作為檢測手段，這種方法具有靈敏度高、快速、簡便、實(shí)用的特點(diǎn)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明合成的人工內(nèi)切酶能特異性地結(jié)合到目標(biāo)DNA上。在此基礎(chǔ)上我們首次采

4、用了鋱離子熒光探針法檢測了三鏈DNA的形成。眾所周知三鏈DNA是反基因技術(shù)及反義技術(shù)的核心，它控制著基因的表達(dá)及抑制作用，因此三鏈DNA也是目前的研究熱點(diǎn)之一。我們的實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明鋱離子熒光探針法能構(gòu)檢測三鏈DNA的形成與否，同時(shí)我們也研究了鋱離子與不同類型的三鏈DNA（嘧啶·嘌呤·嘧啶，嘌呤·嘌呤·嘧啶）作用后的熒光光譜，探討了pH高低,金屬離子的存在對三鏈DNA形成的影響。在上述研究基礎(chǔ)上，我們通過乙二胺把EDTA共價(jià)連接在含有10個(gè)