海洋細(xì)菌Pseudomonas putida中環(huán)二肽及其生物活性研究.pdf

1、海洋環(huán)境特殊:高壓、高鹽（局部高溫）、低營(yíng)養(yǎng)、低溫、少光照，使得海洋生物具備了獨(dú)特的代謝方式，因此其次生代謝產(chǎn)物結(jié)構(gòu)新穎且活性多樣。本文對(duì)分離自美國(guó)圣璜島海域海綿的300株海洋細(xì)菌進(jìn)行了TLC與DAD-HPLC分析，結(jié)果表明分離自海綿的菌株272代謝產(chǎn)物比較豐富。
　　綜合菌落形態(tài)、電鏡掃描和16S rDNA序列測(cè)定，鑒定菌株272為Pseudomonas putida。對(duì)菌株進(jìn)行規(guī)模化發(fā)酵，收集并提取發(fā)酵產(chǎn)物。正相硅膠柱色譜對(duì)粗

2、提物進(jìn)行分段，通過(guò)化學(xué)分析(1H NMR+DAD-HPLC)，鎖定流份Fr.c-1與Fr.d-1中含有大量的環(huán)二肽類化合物。本文以化學(xué)分析（1H NMR+DAD-HPLC）為導(dǎo)向，對(duì)P.putida中環(huán)二肽類化學(xué)物進(jìn)行系統(tǒng)的化學(xué)成分研究。
　　運(yùn)用薄層色譜、正（反）相硅膠色譜及反相高壓液相色譜等化學(xué)分離純化手段，從P.putida發(fā)酵產(chǎn)物的Fr.c-1和Fr.d-1中共分離得到21個(gè)化合物。運(yùn)用1HNMR、13C NMR、APT、

3、1H-1H COSY、HMQC、HMBC、NOESY和X-ray單晶衍射法，鑒定這21個(gè)化合物分別為:環(huán)（4R-L-羥脯氨酸-L-苯丙氨酸）(1)，環(huán)(4R-D-羥脯氨酸-L苯丙氨酸)(2)，環(huán)(D-脯氨酸-L-亮氨酸)(3)，環(huán)(L-脯氨酸-D-亮氨酸)(4)，環(huán)（D-脯氨酸-D-異亮氨酸）(5)，環(huán)(L-脯氨酸-L-丙氨酸)(6)，環(huán)（纈氨酸-丙氨酸）(7)，環(huán)（亮氨酸-丙氨酸）(8)，環(huán)（亮氨酸-甘氨酸）(9)，環(huán)（異亮氨酸-甘氨

4、酸）(10)，環(huán)（纈氨酸-甘氨酸）(11)，環(huán)（苯丙氨酸-甘氨酸）(12)，環(huán)（酪氨酸-甘氨酸）(13)，環(huán)（酪氨酸-丙氨酸）(14)，環(huán)（酪氨酸-纈氨酸）(15)，環(huán)（苯丙氨酸-絲氨酸）(16)，環(huán)（苯丙氨酸-丙氨酸）(17)，環(huán)（酪氨酸-9-Cl-精氨酸）(18-1)，環(huán)（D-酪氨酸-D-脯氨酸）(18-2)，環(huán)（酪氨酸-色氨酸）(19)，環(huán)（丙氨酸-色氨酸）(20)。其中化合物18-1為新化合物，化合物18-2為化合物18-1的人

5、工衍生物。
　　對(duì)已分離鑒定的部分單體化合物進(jìn)行了腫瘤細(xì)胞毒活性、抗硅藻附著活性、群體感應(yīng)抑制活性與α-葡萄糖苷酶抑制活性的篩選?；衔?和17在50μg/mL時(shí)對(duì)Hela細(xì)胞具有一定的腫瘤細(xì)胞毒活性，抑制率分別為53.55％和58.60％。化合物17和20在濃度為50μg/mL時(shí)具有顯著的抑制硅藻附著活性，抑制率分別為50％和85％。海洋硅藻是海洋生物污損早期構(gòu)成生物膜的主要物種，而海洋生物污損給海洋資源的綜合開發(fā)利用及軍事部署