APC-C-CDC20在中國鹵蟲胚胎滯育解除過程中的作用.pdf

1、中國鹵蟲（Artemia sinica）是一種廣泛生活在高鹽水體的小型甲殼動物，具有極強(qiáng)抗逆能力，在遇到不利環(huán)境時，能進(jìn)入滯育階段，形成特殊的滯育卵而暫時停滯發(fā)育，當(dāng)環(huán)境適宜時能解除滯育重新發(fā)育，因其具有該項(xiàng)特點(diǎn)，已經(jīng)成為發(fā)育生物學(xué)研究的實(shí)驗(yàn)生物。
　　泛素化途徑通過E1，E2，E3一系列酶的催化降解靶蛋白，APC/C是一個代表性的E3泛素連接酶，并通過26S蛋白酶體降解特定的有絲分裂調(diào)節(jié)因子。CDC20(cell divisio

2、n cycle20)是后期促進(jìn)復(fù)合物APC/C的兩個輔酶因子之一，能在特定時間點(diǎn)結(jié)合并激活A(yù)PC復(fù)合物而發(fā)揮作用，在指導(dǎo)細(xì)胞周期相關(guān)蛋白泛素化降解的過程中發(fā)揮重要的作用，保證正常的染色體分離。由于大部分的細(xì)胞周期相關(guān)蛋白都通過泛素化途徑進(jìn)行降解，CDC20在對細(xì)胞周期的調(diào)控作用起關(guān)鍵作用。然而，目前為止對As-CDC20在中國鹵蟲滯育卵重新發(fā)育的過程中對細(xì)胞周期的調(diào)控作用尚不清楚。
　　在本研究中，首次成功克隆得到了As-cdc2

3、0長度為1842bp的基因全長，包括1512bp的開放閱讀框，50bp的5'UTR以及280 bp的3'-UTR，編碼氨基酸503個，蛋白分子量為55.5KDa。生物信息學(xué)分析顯示As-CDC20主要定位于細(xì)胞核，為一個非跨膜非分泌性的親水性蛋白質(zhì)，包含30個預(yù)測的磷酸位點(diǎn)。蛋白多序列分析顯示CDC20為高度保守蛋白，尤其在WD40結(jié)構(gòu)域區(qū)域。原位雜交結(jié)果顯示As-cdc20在中國鹵蟲各發(fā)育時期的表達(dá)部位不存在組織或器官特異性。實(shí)時熒光

4、定量PCR及免疫印跡試驗(yàn)分別從基因及蛋白水平對As-CDC20的表達(dá)量進(jìn)行分析，結(jié)果顯示在鹵蟲發(fā)育至5h時，表達(dá)量達(dá)到峰值，并隨著鹵蟲的發(fā)育而逐漸降低;與此同時，對As-CDC20在應(yīng)對高鹽、低溫的環(huán)境刺激下的表達(dá)水平進(jìn)行分析，結(jié)果表明在不良條件下的表達(dá)量均低于正常條件。
　　該研究分析了CDC20在中國鹵蟲早期胚胎發(fā)育過程的表達(dá)模式，從而闡述了CDC20在鹵蟲發(fā)育階段對細(xì)胞周期的調(diào)控及在鹵蟲滯育卵重新發(fā)育過程中的關(guān)鍵作用，為進(jìn)一