中國鹵蟲API5在早期胚胎發(fā)育過程中的表達(dá)及其功能研究.pdf

1、中國鹵蟲隸屬于節(jié)肢動物門(Phylum Arthropoda),甲殼動物亞門(Crustacea),鰓足綱(Branchiopoda),無甲目(Order Anostraca),鹵蟲科(Family Artemiidae),鹵蟲屬(Genus Artemia)。中國鹵蟲廣泛分布于我國內(nèi)蒙、西藏、新疆、青海、山西等地的鹽湖、鹽井等高鹽水體中,并且是一種優(yōu)質(zhì)的生物餌料被應(yīng)用于養(yǎng)殖業(yè)。
　　 Apoptosis inhibitor5(

2、API5)在中國鹵蟲的胚胎發(fā)育過程中起著重要的作用。API5是細(xì)胞凋亡抑制相關(guān)蛋白,在脊椎動物與無脊椎動物中調(diào)控細(xì)胞凋亡。本研究采用分子克隆技術(shù),得到長度為403bp的中國鹵蟲API5基因片段。并利用3’-5'RACE技術(shù),克隆了全長為1711bp的中國鹵蟲API5基因的cDNA序列。經(jīng)Blast在線分析軟件的分析研究,確定該序列為中國鹵蟲API5基因(GenBank accession No.:JF808079)。
　　 實驗

3、利用Real-time PCR技術(shù)對API5基因在中國鹵蟲胚胎發(fā)育各時期的表達(dá)情況進(jìn)行分析。結(jié)果發(fā)現(xiàn)原腸胚時期基因的相對表達(dá)量最高；胚胎發(fā)育0h～10h,API5基因的相對表達(dá)量逐漸升高；胚胎發(fā)育15h～40h期間,基因的相對表達(dá)量逐漸降低；胚胎發(fā)育3d～7d期間,基因的相對表達(dá)量逐漸升高；發(fā)育10d時,基因的相對表達(dá)量下降；總體呈現(xiàn)先升高后降低再升高的趨勢。研究表明API5基因是中國鹵蟲胚胎發(fā)育過程中的重要調(diào)控基因,并且它在鹵蟲滯育期

4、具有抑制凋亡以保證胚胎正常發(fā)育的功能。
　　 實驗對其功能進(jìn)行研究,發(fā)現(xiàn)了不同鹽度、溫度和菌刺激都會對API5基因的表達(dá)產(chǎn)生顯著影響。使用不同鹽度刺激鹵蟲后,API5基因的相對表達(dá)量會隨著鹽濃度的增加而呈顯著升高的趨勢(p<0.01)。不同溫度刺激鹵蟲后,API5基因的相對表達(dá)量隨著溫度的降低而呈逐漸升高的趨勢。使用革蘭氏陰性菌刺激中國鹵蟲后,API5基因的相對表達(dá)量隨陰性菌液濃度增加而降低。而使用革蘭氏陽性菌刺激中國鹵蟲后,基