南極海洋芽孢桿菌多肽PBN11-8的分離純化及抗腫瘤活性研究.pdf

1、腫瘤是全球危害人類健康的最嚴(yán)重的疾病之一，抗腫瘤藥物具有巨大的市場需求，抗腫瘤先導(dǎo)化合物的發(fā)現(xiàn)具有重要意義。極地是一個(gè)潛在、重要的微生物資源庫，是產(chǎn)生新型生物活性物質(zhì)和先導(dǎo)化合物的微生物潛在種源地。我們從南極不同站點(diǎn)采集的表層海水中分離獲得了大量微生物，以人肝癌細(xì)胞BEL-7402為模型，采用MTT活性跟蹤法，對獲得的微生物的代謝產(chǎn)物進(jìn)行抗腫瘤活性的篩選，結(jié)果發(fā)現(xiàn)菌株N11-8的發(fā)酵代謝產(chǎn)物的抑制率達(dá)到68.1％。通過16S rRNA的

2、序列分析和生理生化特征試驗(yàn)，初步確定了N11-8菌株為芽孢桿菌屬(Bacillus)。隨后，采用MTT活性跟蹤法和SDS-PAGE凝膠電泳檢測，通過超濾，硫酸銨沉淀，強(qiáng)陰離子交換層析，高效液相層析，從南極海洋芽胞桿菌N11-8的發(fā)酵液中分離純化得到了一種具有抗腫瘤活性的多肽PBN11-8（Peptide fromBacillus sp.N11-8），采用質(zhì)譜確定其分子量為19kDa，測定多肽N端15個(gè)氨基酸的序列是ASTGSQKVTVY

3、AVAD。MTT法檢測發(fā)現(xiàn)PBN11-8對人肝癌細(xì)胞BEL-7402、人腎透明細(xì)胞腺癌細(xì)胞786-0、人卵巢癌細(xì)胞NIH:OVCAR-3和人大細(xì)胞肺癌細(xì)胞NCI-H460均具有較好的增殖抑制作用，IC50值分別為1.56、1.80、1.81和2.31μg/mL，但對人正常肝細(xì)胞L-02的增殖抑制作用相對較小;通過相差顯微鏡觀察，PBN11-8可以使BEL-7402細(xì)胞變圓，細(xì)胞體積皺縮變小，細(xì)胞間連接減少，最終導(dǎo)致細(xì)胞大部分脫落，細(xì)胞數(shù)