人類干擾素調(diào)節(jié)因子7重組蛋白的純化和抗體制備.pdf

1、干擾素（IFNs）是宿主抵御病毒感染的最早期免疫應(yīng)答的重要參與者。其在引發(fā)抗病毒反應(yīng)和細(xì)胞生長調(diào)控以及免疫激活等方面起著重要的作用，其中IFN家族中的I型IFN又是人類先天和后天免疫應(yīng)答的主要組成因子，其誘導(dǎo)的宿主細(xì)胞抗病毒應(yīng)答是宿主抗病毒感染的主要防御機(jī)制。而干擾素調(diào)節(jié)因子7（IRF-7）作為一種參與I型干擾素誘導(dǎo)合成和活性調(diào)控的關(guān)鍵性調(diào)控因子，在抗病毒感染方面有著重要的地位。此外IRF-7還可直接作用于病毒的啟動(dòng)子以達(dá)到抑制病毒激活

2、的目的。
　　 本文以原核表達(dá)質(zhì)粒pET28a為載體，構(gòu)建了一系列的IRF-7重組質(zhì)粒，分別是pET28a-IRF-7A(146-246 aa)、pET28a-IRF-7A(146-311 aa)、pET28a-IRF-7A(373-467aa)、pET28a-IRF-7A(274-467 aa)、pET28a-IRF-7A(146-503 aa)和pET28a-IRF-7A(146-227 and323-503 aa)，并將它

3、們分別轉(zhuǎn)化E.coli BL21(DE3)以備誘導(dǎo)表達(dá)，并對(duì)其中含pET28a-IRF-7A(274-467 aa)、pET28a-IRF-7A(146-503aa)質(zhì)粒的克隆進(jìn)行了蛋白誘導(dǎo)表達(dá)條件的優(yōu)化，最終確定了兩者的最終誘導(dǎo)條件為0.05 mmol/L的IPTG，28℃，誘導(dǎo)時(shí)長為4h。以此誘導(dǎo)條件對(duì)蛋白IRF-7A(274-467 aa)和IRF-7A(146-503aa)進(jìn)行了大量誘導(dǎo)表達(dá)，并利用Ni親和層析的方法對(duì)它們進(jìn)行了