實驗七 植物組織中可溶性蛋白質

1、實驗七植物組織中可溶性蛋白質、可溶性糖含量的測定I、植物組織中可溶性蛋白質的測定、植物組織中可溶性蛋白質的測定一、原理由于蛋白質中存在著含有共軛雙鍵的酪氨酸和色氨酸，因此蛋白質具有吸收紫外光的性質，最大吸收峰在280nm波長處。在此波長范圍內，蛋白質溶液的光密度OD280nm與其濃度呈正比關系，可作定量測定。二、材料、儀器設備及試劑（一）材料植物葉片（二）儀器設備紫外分光光度計、分析天平、離心機、恒溫水浴鍋、研缽、移液管等（三）試劑0.

2、1molLpH7.0磷酸液三、實驗步驟1樣品中蛋白質的提取稱取植物葉片0.5~1.0g放入研缽中，加入2mL0.1molL的磷酸緩沖液，研磨成勻漿，轉移至15mL離心管中，再用6mL磷酸緩沖液分次洗滌研缽，洗滌液收集于同一離心管中，在室溫（20~25℃）下放置05~1.0h以充分提取，然后在4000rmin離心10min，將上清液轉入25mL容量瓶中，并以磷酸緩沖液定容至刻度，即得待測樣品提取液。2樣品中蛋白質含量的測定取適量稀釋后的蛋

3、白質提取液，在紫外分光光度計上，分別于280nm和260nm波長條件下（以磷酸緩沖液為空白對照），測定提取液的吸收值，代入公式即可計算出樣品中蛋白質的含量。四、結果計算樣品中蛋白質的濃度（mgmL）=（1.45A280—0.74A260）稀釋倍數(shù)式中：1.45和0.74——校正值。A280——蛋白質溶液在280nm處的吸光度。A260——蛋白質溶液在260nm處的吸光度Ⅱ、植物組織中可溶性糖的測定Ⅱ、植物組織中可溶性糖的測定蒽酮法蒽酮法

4、一、原理糖在濃硫酸作用下，可經脫水反應生成糠醛或羥甲基糠醛，生成的糠醛或羥甲基糠醛可與蒽酮反應生成藍綠色糠醛衍生物，在一定范圍內，顏色的深淺與糖的含量成正比，故可用于糖的定量測定。管號試劑012345100μgmL葡萄糖溶液（mL）00.20.40.60.81.0蒸餾水（mL）1.00.80.60.40.20蒽酮試劑（mL）5.05.05.05.05.05.0葡萄糖量（μg）020406080100將各管快速搖動混勻后，在沸水浴中煮10