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1、選修選修1《1《生物技術(shù)實(shí)踐生物技術(shù)實(shí)踐》知識(shí)歸納圖解知識(shí)歸納圖解(一)培養(yǎng)基的基本知識(shí)(一)培養(yǎng)基的基本知識(shí)1培養(yǎng)基的營(yíng)養(yǎng)成分營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)定義作用主要來源及所涉及的微生物碳源凡是能提供微生物所需碳元素的物質(zhì)構(gòu)成生物細(xì)胞、生物體及細(xì)胞代謝產(chǎn)物,有些能為異養(yǎng)生物提供能源無機(jī)化合物:C02、NaHC03等(自養(yǎng)生物)有機(jī)化合物:糖類、脂質(zhì)、花生粉餅、石油等(異養(yǎng)生物)氮源凡是能提供微生物所需氮元素的物質(zhì)合成蛋白質(zhì)、核酸及含氮的代謝產(chǎn)物,也可為異
2、養(yǎng)微生物提供能源無機(jī)化合物:N2、NH3、銨鹽、硝酸鹽,自養(yǎng)生物有機(jī)化合物:尿素、牛肉膏、蛋白胨等,異養(yǎng)生物水分生物體內(nèi)含量最高的組成成分,分為結(jié)合水和自由水良好的溶劑、細(xì)胞生活及生化反應(yīng)的介質(zhì)、參與物質(zhì)運(yùn)輸及參與生化反應(yīng)的反應(yīng)物培養(yǎng)基、大氣、代謝產(chǎn)物無機(jī)鹽為微生物提供大量除C、H、0以外的各種元素細(xì)胞組成成分,生命調(diào)節(jié)物質(zhì),自養(yǎng)菌的能源或其他營(yíng)養(yǎng)來源,酶的激活劑培養(yǎng)基、大氣等環(huán)境生長(zhǎng)因子微生物正常生長(zhǎng)繁殖,必不可少的微量有機(jī)物可作為酶
3、與核酸等的組成成分維生素、氨基酸、堿基等高考警示鐘高考警示鐘自養(yǎng)微生物與異養(yǎng)微生物所需的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)不同(1)自養(yǎng)微生物所需的碳源、氮源來自含碳、含氮的無機(jī)物,而異養(yǎng)微生物需要的碳源、氮源來自含碳、含氮的有機(jī)物,因此可根據(jù)培養(yǎng)基中營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)判斷微生物的代謝類型。微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)果酒和果醋的制作果酒和果醋的制作挑選葡萄沖洗榨汁酒精發(fā)酵醋酸發(fā)酵注意:①要先清洗后除枝梗(避免除去枝梗時(shí)引起葡萄破損,增加被雜菌污染的機(jī)會(huì),同時(shí),防
4、止葡萄汁流失)②不能反復(fù)沖洗(避免菌種流失)注意:選擇新鮮的葡萄注意:①榨汁機(jī)要清洗干凈,并晾干(防雜菌污染)②避免將果核壓破(因果核含有多種有害葡萄酒風(fēng)味的物質(zhì))原理:主要菌種是酵母菌。酵母菌是異養(yǎng)兼性厭氧微生物C6H12O6→C2H5OH+C02溫度:20℃左右最適合酵母菌繁殖,一般控制在18℃~25℃。果酒果醋注意:①發(fā)酵裝置要清洗干凈,并用體積分?jǐn)?shù)為70%的酒精消毒②發(fā)酵瓶裝入葡萄汁后留有l(wèi)3的空間(目的是先讓酵母菌進(jìn)行有氧呼吸
5、快速繁殖,耗盡氧氣后再進(jìn)行酒精發(fā)酵;其次,防止發(fā)酵過程中產(chǎn)生的CO2造成發(fā)酵液的溢出)③如用帶蓋的瓶子制葡萄酒,每隔12h左右將瓶蓋擰松一次(注意不是打開瓶蓋,防雜菌污染),之后再將瓶蓋擰緊(目的:排出多余的氣體放炸裂)④裝入葡萄汁封閉充氣口(無氧環(huán)境和放雜菌污染)⑤發(fā)酵過程中,隨著酒精度數(shù)的提高,葡萄酒呈現(xiàn)深紅色(因紅葡萄皮的色素也進(jìn)入發(fā)酵液)⑥酒精的鑒定:與酸性重鉻酸鉀→呈灰綠色對(duì)照組→2mL白酒實(shí)驗(yàn)組→2mL發(fā)酵液試管甲→2mL發(fā)
6、酵前液試管乙→2mL發(fā)酵后液3mLL的H2SO43滴→混勻→重鉻酸鉀3滴→觀察3mLL的H2SO43滴→混勻→重鉻酸鉀3滴→觀察原理:主要菌種是醋酸桿菌(異養(yǎng)需氧型)①當(dāng)氧氣糖源均充足時(shí),糖→醋酸②當(dāng)氧氣充足、缺少糖源時(shí),乙醇→乙醛→醋酸溫度:30℃~35℃。注意:需適時(shí)通入空氣高考警示高考警示:①由于醋酸菌和乳酸菌屬于原核生物,所以在利用者兩類微生物時(shí),其環(huán)境中一定不能加入抗生素。②酵母菌在營(yíng)養(yǎng)和氧氣充足時(shí)進(jìn)行出芽生殖(1)在培養(yǎng)基中
7、加入某種化學(xué)物質(zhì)。例如,加入青霉素可以分離出酵母菌和霉菌;加入高濃度的食鹽可以得到金黃色葡萄球菌。這里的加入是在主要營(yíng)養(yǎng)成分完整的基礎(chǔ)上加入。(2)改變培養(yǎng)基中的營(yíng)養(yǎng)成分。例如缺乏氮源時(shí)可以分離出固氮微生物;石油作為惟一碳源時(shí),可以分離出消除石油污染的微生物。(3)改變微生物的培養(yǎng)條件。例如,將培養(yǎng)基放在高溫環(huán)境下培養(yǎng),可以得到耐高溫的微生物。(二)滅菌技術(shù)(二)滅菌技術(shù)1無菌技術(shù)的概念在微生物培養(yǎng)中,獲得純凈培養(yǎng)物的關(guān)鍵是防止外來雜菌
8、入侵,其主要技術(shù)是無菌操作。無菌技術(shù)是指通過一定物理、化學(xué)的手段,防止實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)物被外來微生物污染。無菌技術(shù)主要圍繞如何避免雜菌污染展開的。2消毒、滅菌的方法項(xiàng)目概念常用方法應(yīng)用范圍巴氏消毒法:70~75℃水中煮30min或在80℃水中煮15min一些不耐高溫的物體如牛奶煮沸消毒法:在100℃水浴中煮沸5~6min一般物品化學(xué)藥劑消毒法:用乙醇、氯氣、漂白粉、KMnO4等藥劑來殺死或抑制細(xì)菌生長(zhǎng)或繁殖可用來對(duì)環(huán)境、雙手和衣物等消毒消毒使
9、用較為溫和的物理或化學(xué)方法,僅殺死物體表面或內(nèi)部一部分對(duì)人體等有害的微生物(不包括孢子和芽孢)紫外線消毒法:30W紫外燈照射30min接種室灼燒滅菌法:酒精燈火焰接種工具如接種環(huán)、接種針等干熱滅菌法:在160~170℃加熱1~2h如玻璃器皿(吸管、培養(yǎng)皿)和金屬用具滅菌使用強(qiáng)烈的理化因素殺死物體內(nèi)外所有的微生物,包括芽孢和孢子高壓蒸汽滅菌:壓力為100kPa,溫度為12l℃的條件下,維持15~30min培養(yǎng)基及容器的滅菌注意:注意:①無
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