輸血相容性檢測

1、輸血相容性檢測,,內 容 提 要,紅細胞抗原抗體檢測技術,抗體的篩選及鑒定,交叉配血,,抗篩和配血結果分析,案例分析,紅細胞抗原抗體檢測技術,,鹽水介質凝集試驗抗人球蛋白試驗酶介質凝集試驗凝聚胺試驗微柱凝膠免疫試驗,,鹽水介質凝集試驗,鹽水介質中紅細胞上的抗原決定簇與相應抗體分子上的抗原結合位點結合，交叉聯(lián)結形成肉眼可見的凝集。用于IgM抗體的檢出、鑒定、鹽水配血試驗以及血型的鑒定。當特異性的IgG類抗A、抗B的濃度足

2、夠大時，在鹽水介質里也能與相應的紅細胞發(fā)生凝集反應，與紅細胞表面抗原位點數目和抗原決定簇位置有關。,,方法：玻片法-便于顯微鏡觀察結果 試管法-適用于不同溫度、便于洗滌反應溫度：4～22℃臨床意義：鹽水凝集試驗陽性，并在37℃也有活性的抗體有意義。室溫有活性，37℃無活性者臨床意義不大。優(yōu)點：簡便、快捷、直觀。 缺點：不能發(fā)現(xiàn)不完全抗體。,鹽水介質凝集試驗,,抗人球蛋白試驗是1945年由

3、Coombs等人建立的，又稱Coombs試驗?？谷饲虻鞍自囼灥慕⒃谘脱鍖W上有著非常重要的意義。分為直接抗人球蛋白試驗（DAT）和間接抗人球蛋白試驗（IAT）。,抗人球蛋白試驗,,IgG類血型抗體（主要是免疫抗體，如Rh血型抗體）分子量小，與紅細胞相應抗原結合后，在鹽水介質中不出現(xiàn)肉眼可見的凝集反應，稱之為不完全抗體，但在加入抗-IgG后，以其搭橋作用則可出現(xiàn)凝集反應。補體成分在體內被紅細胞抗原抗體復合物激活以后，結合在紅細胞

4、表面。在體外含補體的多克隆抗體，或抗C3b、抗C3d等單特異性抗體與補體致敏的紅細胞反應，使之凝集也稱為抗球蛋白試驗。,抗人球蛋白試驗原理,,DAT是檢測體內致敏紅細胞的一種方法，用于檢查紅細胞是否已被不完全抗體所致敏，尤其是IgG和C3d包被的紅細胞。應用：HDN和自身免疫性溶血性貧血的診斷紅細胞被藥物抗體致敏的檢查急性和遲發(fā)性溶血性輸血反應的檢查,直接抗人球蛋白試驗,,IAT是檢測血清中不完全抗體的一種，用于測定在體外能引起

5、紅細胞致敏的抗體。應用：血型的鑒定，如Rh血型抗體的檢出和鑒定交叉配血,間接抗人球蛋白試驗,,原理：紅細胞表面有豐富的唾液酸，帶有負電荷，是紅細胞相互排斥的原理。蛋白水解酶能消化破壞這種唾液酸，減少紅細胞表面的負電荷以及紅細胞之間的排斥力，縮短了紅細胞之間的間距，使IgG抗體分子能與有相應抗原的紅細胞產生凝集常用的酶（0.5%）：菠蘿酶、木瓜酶、胰酶、無花果酶,酶介質凝集試驗,,優(yōu)點： 酶法能顯著增強一些抗原抗體系統(tǒng)的反

6、應活性，Rh和Kidd系統(tǒng)最明顯缺點： ①酶法處理RBC，蛋白酶會使RBC的抗原結構破壞和變性（M、N、Fya、Fyb） ②操作繁復，少數人對酶液過敏,酶介質凝集試驗,,原理： 凝聚胺是一種多價陽離子聚合物，在溶液中有多個陽離子基團，能中和紅細胞表面的負電荷，并借助正負電荷的作用，引起紅細胞的非特異性凝集。 當紅細胞與血清在低離子介質中孵育后，IgG抗體與紅細胞上相應的抗原結合在凝聚胺的作用下發(fā)生凝聚。凝集和凝

7、聚在表面上不能區(qū)分，再加入枸櫞酸鈉重懸液，枸櫞酸根的負電荷與凝聚胺上的正電荷中和，非特異性凝集現(xiàn)象消失，而真正的凝集不會消失。,凝聚胺試驗,,微柱凝膠試驗,,原理：微柱凝膠技術是用特定的化學物質做成微型凝膠柱，柱的上端有一個加樣反應室?？乖贵w反應后離心，凝膠柱起過篩作用，紅細胞凝集塊不能通過凝膠的間隙而留在凝膠的上部，未凝集的紅細胞通過凝膠的間隙，沉積到底部。,微柱凝膠免疫反應的本質：凝集反應,,紅細胞抗原與相應抗體反應出現(xiàn)凝集。根據

8、紅細胞在膠質介質中的位置肉眼判斷。,微柱凝膠試驗,,,特異性膠：抗A、抗B、抗D中性膠：對照孔、反定型抗人球蛋白膠：抗篩、交叉配血,幾種方法的比較,,,抗體的篩選及鑒定,,有臨床意義的抗體：能引起新生兒溶血病、引發(fā)溶血性輸血反應，或者使輸入的紅細胞存活期減少的在37℃有反應的同種異型抗體不規(guī)則抗體：抗A，抗B以外的抗體包括：同種抗體和自身抗體,,抗體篩選方法,,鹽水介質凝集法抗人球蛋白法凝聚胺法微柱凝膠法,結果的判讀與解釋

9、,,溶血和血液凝集意義相同，都是抗原抗體反應陽性結果。先觀察有無溶血，后觀察有無凝集。記錄結果，并與以前結果對照。抗體篩選試驗不一定能檢出所有有臨床意義的抗體。一些低頻抗原的抗體或有劑量效應的抗體，可能被漏檢。,抗體鑒定,,通過篩選，抗體一經檢出，應進一步作抗體鑒定試驗，以確定其特異性。①自身細胞檢查 - 排除非特異性 ②譜紅細胞檢查,抗體鑒定,,譜紅細胞： 一般是由8-16人份的已知血型表現(xiàn)型O型紅細胞組成，具

10、有各種不同的抗原成分，根據譜紅細胞的反應格局一般可以鑒定常見的抗體。方法： 在鹽水法基礎上、靈活應用白蛋白介質法、酶技術及抗人球蛋白實驗。,交叉配血,,主側：受血者血清+供者紅細胞 檢測對供者紅細胞起反應的抗體次側：受血者紅細胞+供者血清 檢測對受者紅細胞起反應的抗體自身對照：受血者紅細胞+受血者血清 排除自身抗

11、體、直接抗球蛋白試 驗陽性及紅細胞緡錢狀凝集,緡錢狀凝集,,也稱串錢狀凝集，是一種假凝集，紅細胞像許多錢幣堆積在一起。血漿球蛋白異常，如高球蛋白血癥、巨球蛋白血癥。使用大分子右旋糖酐或羥乙基淀粉擴容。將血清適當稀釋。,抗篩和配血結果分析,,主側交叉配血不相合的原因： ①病人或供血者ABO血型錯誤 ②病人血清中存在同種抗體或自身抗體，與供血 者紅細胞上的相應抗原反應。

12、 ③供血者紅細胞上已經包被了抗體，導致抗人球蛋白試驗陽性。 ④病人血清異常，如白蛋白／球蛋白比例不正常引起緡錢狀假凝集，血清中存在高分子聚合物的血漿擴容劑引起假陽性（用鹽水添加試驗來解決）。 ⑤試驗系統(tǒng)被污染。,抗篩和配血結果分析,,主側：+，自身對照：-，抗篩：- ①患者或供血者ABO血型錯誤→重新定型 ②患者血清中可能含ABO抗體→檢查病人亞型、輸血史及移植史 ③患者血清中有抗體，

13、但篩選細胞上無相應抗原→對患者血清進行抗體鑒定 ④供血者紅細胞直抗試驗陽性→檢查供血者直抗試驗,抗篩和配血結果分析,,主側：+，自身對照：-，抗篩：+ 患者血清中的同種抗體與供血者紅細胞上相應抗原反應→對患者血清進行抗體鑒定，選擇無相應抗原的血,抗篩和配血結果分析,,主側：+，自身對照：+，抗篩：+ ①病人血清中可能同時存在自身抗體和同種抗體→對病人血清進行抗體吸收及鑒定，用吸收后血清配血 ②病人血清不正

14、常：白/球比不正常、血漿擴容物→鹽水添加試驗③試驗系統(tǒng)污染→重新抽樣檢測,抗篩和配血結果分析,,次測交叉配血不相合的原因： ①供血者血漿中存在針對患者紅細胞抗原的抗體。 ②病人與供血者的ABO血型不相合。 ③病人的紅細胞已經包被了抗體，直抗試驗陽性。,案例分析,,案例1： 患者女，85歲，因重度貧血，申請輸注紅細胞懸液3u。交叉配血結果為：患者血型為A型Rh陽性，抗篩（+），自身對照（-），交叉配

15、血時主側凝集程度為（+），次側不凝集。問：如何處理？,案例分析,,案例2： 患者，女，61歲，行關節(jié)置換術。術中申請紅細胞懸液3u，按操作要求進行配血。確定患者血型為A型Rh陽性，抗篩（-），在做交叉配血時發(fā)現(xiàn)，兩位供血者提供的紅細胞懸液在次端都與患者血漿發(fā)生反應，出現(xiàn)不同程度的凝集。此時，加做患者的直抗試驗和自身配血對照，得到結果為：直抗試驗為（+），自身配血對照出現(xiàn)“+”的凝集。 問：如何處理？,歡迎各位領導和同事指