臨床血液學(xué)檢驗(yàn)造血檢驗(yàn)基本方法細(xì)胞化學(xué)染色檢驗(yàn)

1、1,第一章 造血與血細(xì)胞檢驗(yàn)第七節(jié) 骨髓檢查二、細(xì)胞化學(xué)染色,2,普通染色,免疫細(xì)胞化學(xué)染色,細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢驗(yàn)技術(shù),,細(xì)胞化學(xué)染色,,,3,【細(xì)胞化學(xué)染色概述】細(xì)胞化學(xué)染色的概念,4,細(xì)胞化學(xué)染色的臨床應(yīng)用細(xì)胞化學(xué)染色的基本步驟,幫助識(shí)別細(xì)胞了解細(xì)胞的生理狀態(tài)及功能輔助診斷及鑒別診斷血液系統(tǒng)疾病,取材：新鮮骨髓片或血片制片染色：固定、有色沉淀反應(yīng)（顯色）、復(fù)染顯微鏡檢查：觀察染色是否成功，觀察目標(biāo)細(xì)胞的染色結(jié)

2、果填寫報(bào)告單：定性（陽性/陰性）、半定量（陽性率/陽性積分/陽性程度）登記及存檔,5,6,7,復(fù)染的目的在于使各種細(xì)胞能顯示出來以便于觀察。選擇復(fù)染液的顏色應(yīng)與有色沉淀的顏色有明顯的對(duì)比度，即能使細(xì)胞結(jié)構(gòu)顯示又能清楚地看出細(xì)胞化學(xué)染色結(jié)果,8,（一）用于貧血的細(xì)胞化學(xué)染色（鐵染色）『用于貧血的常規(guī)細(xì)胞化學(xué)染色』 外周血網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)（Ret/Retic/RC） 骨髓鐵染色,9,【復(fù)習(xí)：外周血網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)（Ret/Ret

3、ic/RC）】『?jiǎn)栴}』在瑞氏染色下，能否較準(zhǔn)確地區(qū)別成熟紅細(xì)胞與未完全成熟的紅細(xì)胞（網(wǎng)織紅細(xì)胞）網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)有哪兩種方法？在手工操作法中，我們?nèi)旧坝^察的是哪種化學(xué)物質(zhì)網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)的參考值是多少？有什么臨床意義,手工活體染色法和儀器法,RNA,0.5％～1.5％,反映骨髓中紅系的造血情況，用于貧血的診斷、鑒別診斷及療效觀察,不能，未完全成熟的紅細(xì)胞在瑞氏染色下表現(xiàn)為嗜多色紅細(xì)胞,10,【骨髓鐵染色】染色原理及方法,貯存鐵

4、 鐵蛋白 含鐵血黃素,,11,標(biāo)本片,12,正常血細(xì)胞的染色結(jié)果細(xì)胞外鐵：位于骨髓小粒內(nèi)或巨噬細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)（即幼紅細(xì)胞外）細(xì)胞內(nèi)鐵：位于幼紅細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)的鐵鐵粒幼紅細(xì)胞：胞質(zhì)中出現(xiàn)藍(lán)色鐵顆粒的幼紅細(xì)胞。計(jì)數(shù)100個(gè)中幼紅和晚幼紅細(xì)胞中鐵粒幼紅細(xì)胞的百分比即為細(xì)胞內(nèi)鐵陽性率鐵粒紅細(xì)胞：胞質(zhì)中出現(xiàn)藍(lán)色鐵顆粒的紅細(xì)胞環(huán)形鐵粒幼紅細(xì)胞：幼紅細(xì)胞胞質(zhì)中藍(lán)色顆粒6顆以上，圍繞核周1/2以上者,病理情況,13,14,細(xì)胞外鐵（＋＋＋＋）

5、,細(xì)胞外鐵（＋＋＋）,細(xì)胞外鐵（＋＋）,細(xì)胞外鐵（＋＋＋）,細(xì)胞外鐵（＋＋＋）,細(xì)胞外鐵（＋）,細(xì)胞外鐵（－）,15,鐵粒幼細(xì)胞,鐵粒幼細(xì)胞,幼紅細(xì)胞,環(huán)形鐵粒幼細(xì)胞、鐵粒紅細(xì)胞,16,參考值骨髓細(xì)胞外鐵：（+）~（++），約2/3人為（++），1/3人為（+）骨髓細(xì)胞內(nèi)鐵：鐵粒幼紅細(xì)胞的陽性率為19%~44%，以I型為主，少數(shù)為II型,17,臨床應(yīng)用：用于貧血的診斷及鑒別診斷,18,隱性缺鐵缺鐵性貧血早期,缺鐵缺鐵性貧血,鐵轉(zhuǎn)

6、運(yùn)或利用異常繼發(fā)性貧血,鐵負(fù)荷鐵粒幼細(xì)胞貧血巨幼細(xì)胞貧血再障MDS紅白血病,圖 貧血時(shí)鐵染色常見的四種情形,19,20,（二）中性粒細(xì)胞堿性磷酸酶染色（NAP染色） 染色原理及方法：Kaplow偶氮偶聯(lián)法,,成熟中性粒細(xì)胞胞質(zhì)中,21,標(biāo)本片,22,正常血細(xì)胞的染色結(jié)果陽性反應(yīng)呈棕黑色顆粒，定位于成熟中性粒細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)。其他細(xì)胞呈陰性油鏡下計(jì)數(shù)100個(gè)成熟中性粒細(xì)胞，記錄其陽性程度（－）、（＋）、（2＋）、（

7、3＋）、（4＋），分別記為0、1、2、3、4分。計(jì)算陽性細(xì)胞總數(shù)為陽性率，陽性細(xì)胞的分?jǐn)?shù)總和為陽性積分,23,24,25,參考值：陽性率＜40％，陽性積分14～113。各實(shí)驗(yàn)室之間可有較大差異，應(yīng)建立各實(shí)驗(yàn)室的參考值臨床應(yīng)用NAP染色主要用于骨髓增生性腫瘤（MPN）的診斷與鑒別診斷。NAP是懷疑骨髓增生性腫瘤時(shí)應(yīng)作的常規(guī)細(xì)胞化學(xué)染色慢粒NAP顯著減低，甚至為0，其他MPN為正?；蛟龈呗AP顯著減低，甚至為0，類白NAP顯著增

8、高鑒別其他疾病,26,圖 NAP染色（慢粒血片）,27,圖 NAP染色（類白血片）,28,（三）急性白血病形態(tài)學(xué)分型的細(xì)胞化學(xué)染色 『急性白血病細(xì)胞分型的常規(guī)細(xì)胞化學(xué)染色』過氧化物酶（POX）染色/蘇丹黑B（SBB）染色特異性酯酶（NAS-DCE）染色非特異性酯酶（α-NAE/ α-NBE/ NAS-DAE / ANAE等）染色過碘酸-雪夫（PAS）染色酸性磷酸酶（ACP）染色,29,『?jiǎn)栴}』在各系各階段血細(xì)

9、胞中，最難鑒別的細(xì)胞是什么細(xì)胞正常和一般疾病病人的骨髓片中可以看到原始細(xì)胞嗎在什么情況下，骨髓片中能看見大量的原始細(xì)胞如何鑒別原粒、原淋及原單？,原始細(xì)胞,原粒細(xì)胞＜2％，原紅＜1％，其他原始細(xì)胞罕見,急性白血病骨髓中原始細(xì)胞≥20％,MDS（RAEB）骨髓中原始細(xì)胞5～20％,細(xì)胞化學(xué)染色（一組）,30,過氧化物酶（POX）染色（1）染色方法及原理 復(fù)方聯(lián)苯胺法二氨基聯(lián)苯胺法四甲基聯(lián)苯胺法改良

10、Pereira法（碘化鉀法）,31,過氧化氫,四甲基聯(lián)苯胺,圖 POX染色原理（四甲基聯(lián)苯胺法）,試劑,試劑,32,（2）正常血細(xì)胞的染色反應(yīng)染色成功的標(biāo)志：成熟中性粒細(xì)胞為陽性反應(yīng)各系細(xì)胞染色反應(yīng)粒系：除早期原粒外，其余為陽性單核系：除早期原單外，其余為弱陽性淋巴系：陰性漿細(xì)胞系、紅系、巨核系：均呈陰性,33,34,35,36,【蘇丹黑B染色（SBB染色）】 （1）染色方法及原理 （2）正常血細(xì)胞的染

11、色反應(yīng) （3）臨床應(yīng)用同POX染色。POX更特異，SBB更敏感,37,特異性酯酶染色（氯乙酸AS-D萘酚酯酶染色，CE染色）（1）原理及方法,圖 氯乙酸AS-D萘酚酯酶染色法原理,38,（2）正常血細(xì)胞的染色反應(yīng)染色成功的標(biāo)志：成熟中性粒細(xì)胞為陽性反應(yīng)各系細(xì)胞的染色反應(yīng)粒系：早期原粒為陰性，其余為陽性單核系：陰性淋巴系：陰性漿細(xì)胞系、紅系 、巨核系：均為陰性,39,40,非特異性酯酶染色（1）染色方法及原

12、理：需同時(shí)進(jìn)行NaF抑制試驗(yàn),最特異,41,（2）各系血細(xì)胞的染色反應(yīng)粒系：多為陰性，少數(shù)可呈陽性，陽性反應(yīng)不能被NaF抑制（ α-NBE染色特異性較高，粒系為陰性 ）單核系：早期原單為陰性，其余為陽性，陽性反應(yīng)可被NaF抑制淋巴系：多為陰性，少數(shù)可呈弱陽性，陽性反應(yīng)不能被NaF抑制其他細(xì)胞,42,43,44,【酯酶雙染色】染色原理及方法：在同一張涂片上進(jìn)行特異性酯酶染色和非特異酯酶染色 CE染色與α-NAE染色CE染色與

13、α-NBE染色各系血細(xì)胞的染色反應(yīng)臨床應(yīng)用：對(duì)AML-M4的診斷具有意義,45,過碘酸-雪夫反應(yīng)（PAS染色，又稱糖原染色）（1）染色方法及原理細(xì)胞內(nèi)含有乙二醇基的糖類在過碘酸氧化作用下產(chǎn)生雙醛基，后者與雪夫（Schiff）染料作用，使無色品紅變?yōu)樽霞t色物質(zhì)沉積，定位于含有多糖成分的部位,46,（2）正常血細(xì)胞的染色反應(yīng)染色成功的標(biāo)志：成熟中性粒細(xì)胞為陽性反應(yīng)各系血細(xì)胞的染色反應(yīng)粒系：早期原粒陰性，其余為陽性，呈彌散狀陽性

14、單核系：早期原單陰性，其余為陽性，呈細(xì)顆粒狀陽性淋巴系：多數(shù)為陰性，少數(shù)為陽性，呈粗顆粒狀陽性或塊狀陽性紅系：陰性巨核系：陽性其他細(xì)胞,47,48,酸性磷酸酶（ACP）染色（1）染色方法及原理，同時(shí)做抗酒石酸酸性磷酸酶染色正常血細(xì)胞的染色結(jié)果：粒系、單核系、淋巴系、漿細(xì)胞系、巨核系、紅系等均呈陽性，抗酒石酸酸性磷酸酶染色均呈陰性臨床應(yīng)用：主要用于毛細(xì)胞白血病（HCL）的診斷及鑒別診斷，毛細(xì)胞為陽性或強(qiáng)陽性，不被酒石酸抑制

15、,49,本組細(xì)胞化學(xué)染色的臨床應(yīng)用鑒別原粒、原單及原淋細(xì)胞鑒別急性白血病的類型急性白血病分類細(xì)胞化學(xué)染色鑒別急性白血病類型,示例,50,,51,,,原淋,原粒,原粒+原單,原單,骨髓中白血病性原始細(xì)胞20%,早幼粒,52,細(xì)胞化學(xué)染色,,53,【細(xì)胞化學(xué)染色鑒別急性白血病的類型】POX染色：最重要、首選的常規(guī)細(xì)胞化學(xué)染色，是鑒別急性淋巴細(xì)胞白血病和急粒髓細(xì)胞白血病的重要指標(biāo)原始細(xì)胞陽性率≥3%為AML的M1～M5原始細(xì)胞陽

16、性率＜3%為ALL等 CE染色：能較特異地識(shí)別粒系細(xì)胞，用于輔助鑒別急性白血病的類型（M1、M2、M3、M4）非特異性酯酶染色及NaF抑制試驗(yàn)：能較特異地識(shí)別單核系細(xì)胞，用于輔助鑒別急性白血病的類型（M4、M5）PAS染色：可以鑒別淋巴細(xì)胞與粒、單核細(xì)胞，用于輔助鑒別急性白血病的細(xì)胞類型。本法還用于鑒別幼紅細(xì)胞增生的性質(zhì),54,,55,,原始細(xì)胞：原淋,56,,原始細(xì)胞：原單+原粒,57,『作業(yè)』鑒別鐵染色結(jié)果的相關(guān)概念貯存鐵

17、鐵蛋白含鐵血黃素細(xì)胞外鐵細(xì)胞內(nèi)鐵鐵粒幼細(xì)胞環(huán)形鐵粒幼細(xì)胞鐵粒紅細(xì)胞,58,『作業(yè)』骨髓鐵染色的參考值？貧血時(shí)鐵染色常見以下四種結(jié)果，分別說明機(jī)體內(nèi)鐵處于哪種狀態(tài)外鐵減少，內(nèi)鐵正常外鐵減少或消失，內(nèi)鐵減少外鐵增高，內(nèi)鐵減少外鐵增高，內(nèi)鐵增高,59,『作業(yè)』POX染色、CE染色、非特異性酯酶染色及NaF抑制試驗(yàn)、PAS染色這四種染色，粒系、單核系、淋巴系各階段細(xì)胞的結(jié)果是怎樣的？以列表的方式說明,60,『復(fù)習(xí)』怎