爪哇根結(jié)線蟲致病機(jī)理及食道腺寄生基因的功能研究.pdf

1、爪哇根結(jié)線蟲是一種專性寄生蟲，能侵染多種植物并給這些植物帶來重大損害。它與植物宿主之間建立起一種親密的寄生關(guān)系，誘導(dǎo)植物根細(xì)胞重新分化為取食細(xì)胞，這些細(xì)胞的形成對(duì)線蟲的發(fā)育是必要的。取食細(xì)胞不斷變大，通過細(xì)胞核不斷分裂而細(xì)胞質(zhì)不分裂，最終發(fā)育為巨大細(xì)胞。完整的巨大細(xì)胞包含100多個(gè)細(xì)胞核。通過巨大細(xì)胞，根結(jié)線蟲吸取了大量的營養(yǎng)物質(zhì)和水分。巨大細(xì)胞的形成原理是理解根結(jié)線蟲與植物寄生關(guān)系的關(guān)健。 本論文采用石蠟切片的方法研究了爪哇根

2、結(jié)線蟲的發(fā)育學(xué)。在平均溫度約25度的條件下，從卵殼孵化出的L2期幼蟲，13小時(shí)后開始侵入根尖、兩天后誘導(dǎo)巨大細(xì)胞開始發(fā)育、4天后L2開始定居、8天后巨大細(xì)胞完全形成、13天后形成三期幼蟲、17天后形成四期幼蟲、21天后成蟲開始產(chǎn)卵，25天后產(chǎn)卵幾乎達(dá)到高峰、32天后產(chǎn)卵完畢，線蟲完成生活史。 運(yùn)用免疫組織化學(xué)研究爪哇根結(jié)線蟲的致病機(jī)理。以成蟲的總蛋白免疫昆明小鼠獲得抗體，以此為一抗，利用免疫組織化學(xué)研究了根結(jié)線蟲的各個(gè)發(fā)育階段。

3、結(jié)合根結(jié)線蟲不同發(fā)育時(shí)期的蛋白質(zhì)組分分析結(jié)果，最后表明：根結(jié)線蟲分泌了大量物質(zhì)成分到根組織內(nèi)部，誘導(dǎo)根細(xì)胞重新分化為巨大細(xì)胞。 運(yùn)用免疫印跡和免疫熒光定位兩種方法檢測了食道腺基因在線蟲發(fā)育中的表達(dá)情況。分別提取根結(jié)線蟲成蟲和幼蟲的RNA，進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄獲得cDNA，以此為模板，擴(kuò)增了五個(gè)食道腺基因和一個(gè)熱休克基因，并進(jìn)行表達(dá)和制備抗體，運(yùn)用上述兩種技術(shù)檢測了這些基因在爪哇根結(jié)線蟲不同發(fā)育時(shí)期的表達(dá)情況。結(jié)果表明：msp-3、msp-