辣椒根結(jié)線蟲抗性基因Mel精細(xì)定位.pdf

1、根結(jié)線蟲病是危害辣椒正常生長(zhǎng)、造成減產(chǎn)的主要病害。培育抗病品種是防治根結(jié)線蟲的有效方法。常規(guī)育種周期長(zhǎng)，分子標(biāo)記輔助選擇可以加快育種進(jìn)程。目前，已經(jīng)報(bào)道的辣椒抗根結(jié)線蟲基因至少有9個(gè)，其中，Me1基因是持久和廣譜抗性的，已知其位于第9號(hào)染色體。本文以辣椒抗病品種DH330（Me1）和感病品種0516及其構(gòu)建的BC1群體為試驗(yàn)材料，對(duì)Me1進(jìn)行精細(xì)定位，分析注釋基因，為克隆該基因、研究其抗病機(jī)理以及利用分子標(biāo)記輔助選擇(MAS)的方法培育

2、抗線蟲新品種奠定基礎(chǔ)。主要研究結(jié)果如下:
　　1.采用南方根結(jié)線蟲(M incognita)對(duì)BC1群體1583個(gè)單株進(jìn)行抗性鑒定，抗感株數(shù)比1.04∶1，符合顯性基因1∶1理論分離比(x2=0.495＜3.84)。
　　2.比較根結(jié)線蟲抗性基因定位遺傳圖譜和CM334基因組物理圖譜，選擇了77對(duì)KASPar引物進(jìn)行篩選，4對(duì)在群體間有多態(tài)性;連鎖分析表明標(biāo)記K77和K32與Me1連鎖最緊密，遺傳圖距分別是7.68 cM和1

3、9.04 cM，實(shí)現(xiàn)對(duì)Me1的初步定位。
　　3.利用CM334和Zunla基因組序列，運(yùn)用SSRHunter軟件查找位于標(biāo)記K77和K32之間的簡(jiǎn)單重復(fù)序列。在兩基因組中，二核苷酸AT/TA出現(xiàn)頻率分別為28.5％和81.1％，三核苷酸AAC/CCA/TGT/TTG出現(xiàn)頻率分別為19.0％和44.7％。共開(kāi)發(fā)233個(gè)SSR標(biāo)記，其中6對(duì)在群體中表現(xiàn)多態(tài)性。與BC1群體抗性鑒定的表型結(jié)合，將目標(biāo)基因定位在SSR標(biāo)記24-20和ZY

4、6-13之間210Kb區(qū)間內(nèi)(物理區(qū)間250.08～250.29Mb)，遺傳距離分別為1.83和0.75cM。
　　4.利用生物信息學(xué)獲得定位區(qū)間內(nèi)CM334基因組的基因注釋。根據(jù)序列信息通過(guò)片段擴(kuò)增和測(cè)序，找到親本間的差異片段及位點(diǎn)，設(shè)計(jì)標(biāo)記，將Me1定位在標(biāo)記16880-1和16830-H之間。兩標(biāo)記與Me1的遺傳距離分別為1.44cM和0.63 cM。參考CM334基因組信息，物理圖距130 Kb內(nèi)有4個(gè)注釋基因，下一步研究