食品科學(xué)與工程畢業(yè)論文艾葉抗菌物質(zhì)提取和脫色工藝的研究

1、<p><b>　　本科畢業(yè)論文</b></p><p><b>　　（20 屆）</b></p><p>　　艾葉抗菌物質(zhì)提取和脫色工藝的研究</p><p>　　所在學(xué)院 </p><p>　　專業(yè)班級 食品科學(xué)與工

2、程 </p><p>　　學(xué)生姓名 學(xué)號 </p><p>　　指導(dǎo)教師 職稱 </p><p>　　完成日期 年 月 </p><p><b>　　目 錄</b>&

3、lt;/p><p>　　摘要································

4、3;····································&#

5、183;··························1</p><p>　　ABSTRACT ····

6、83;····································&

7、#183;····································

8、;········2</p><p>　　1 前言························

9、;····································

10、83;································3</p><p>　　2

11、材料與方法····································

12、;····································

13、83;············3</p><p>　　2.1材料與試劑···················

14、;····································

15、83;························3</p><p>　　2.2結(jié)果與分析·······

16、;····································

17、83;····································5

18、</p><p>　　3材料和方法································

19、;····································

20、83;···············8</p><p>　　3.1材料、試劑與儀器···············&#

21、183;····································

22、·················8</p><p>　　3.2多糖分離工藝流程··············

23、;····································

24、83;···················9</p><p>　　3.3多糖脫色············

25、····································

26、3;··································9</p>&

27、lt;p>　　3.4多糖保留率的測定·································&

28、#183;···································9<

29、/p><p>　　3.5多糖抑菌性································&

30、#183;····································

31、;········10</p><p>　　4結(jié)果與分析·······················&#

32、183;····································

33、·······················10</p><p>　　4.1多糖脫色率分析········

34、;····································

35、83;··························10</p><p>　　4.2多糖保留率分析····&#

36、183;····································

37、······························13</p><p>　　4.3抑菌分析·&#

38、183;····································

39、····································

40、3;·····13</p><p>　　5討論··························

41、3;····································&#

42、183;····························14</p><p>　　5.1多糖脫色方法··&#

43、183;····································

44、···································14</p&g

45、t;<p>　　5.2艾葉多糖的應(yīng)用前景································&

46、#183;································14</p><p>

47、　　6結(jié)論····································

48、;····································

49、83;···················14</p><p>　　參考文獻············&#

50、183;····································

51、····································

52、3;··15</p><p>　　致謝······························

53、;····································

54、83;··························16</p><p>　　[摘要] 用自來水作為溶劑, 研究艾葉中抑菌物質(zhì)的提取條件, 得出了最佳

55、的提取條件。對艾葉提取物的脫色方法進行研究。對艾葉提取物分別采用過氧化氫、次硫酸鈉、活性炭和大孔陰離子D315進行脫色。通過比較艾葉提取物的脫色率、保留率及抑菌性可以發(fā)現(xiàn)，這四種方法對艾葉提取物都有脫色效果。雙氧水和次硫酸鈉脫色后抑菌物質(zhì)保留率較低，抑菌效果較差。活性碳的脫色率是87.8%，多糖保留率是81.4%。樹脂D314的脫色率是83.3%，多糖保留率是76.5%?？梢钥闯鰳渲突钚蕴棵撋黠@優(yōu)于過氧化氫和次硫酸鈉脫色法，但是活

56、性炭脫色后的多糖溶液中殘留下的活性炭很難清除，影響了多糖的品質(zhì)，最好的方法是樹脂脫色。</p><p>　　[關(guān)鍵詞]艾葉；抗菌物質(zhì)；提取物；脫色</p><p>　　[Abstract] Use tap water as solvent, and research in the fungus suppression of moxa out the best extraction cond

57、itions, the extraction conditions. The leaf extract of ai discoloring method study. Moxa were used to extract hydrogen peroxide, times and large orifice, activated carbon sodium D315 for decoloring anionic. Through compa

58、ring the extracts of moxa determined.the decolored rate, BaoLiuLv and antibacterial property can be found, the four methods of moxa extract of decolorization are. Hydro</p><p>　　[Key words] moxa；Antifungal s

59、ubstances；extract；decoloring</p><p><b>　　1 前言</b></p><p>　　艾葉（Folium Artemisia argyi）它有叫大艾葉，杜艾葉，萎蒿，為菊科植物艾（Artemisia argyi Levl et．Vant）的葉子。它是一種廣泛分布的多年生草本植物[1]。艾葉是常用的中醫(yī)藥，微溫，味苦，無毒，有理氣血

60、，逐寒濕、止血、溫經(jīng)、安胎等作用。用于少 腹冷痛，宮冷不孕，經(jīng)寒不調(diào)，吐血，妊娠下血，崩漏經(jīng)多；外治皮膚瘙癢。艾葉的主要成分為揮發(fā)油，艾葉揮發(fā)油的化學(xué)成分非常復(fù)雜，根據(jù)環(huán)境和氣候條件的不同, 不同產(chǎn)地的艾葉化學(xué)成分也有明顯的差異[2]。其次艾葉中還含有多糖類、黃酮類、微量元素等，正因為其成分的復(fù)雜性，艾葉的藥理作用也表現(xiàn)出多樣性，現(xiàn)代研究表明其有抗病毒、止血、平喘、鎮(zhèn)痛、抗菌、抗過敏等作用[

61、3]。目前通過反復(fù)硅膠柱色譜、Sep hadex LH220凝膠柱色譜、重結(jié)晶、制備TLC等方法進行分離純化的方法,共分離得到了10個化合物,通過理化常數(shù)的測定和波譜分析等手段進行鑒定其化學(xué)結(jié)構(gòu), 分別為isotanciloide ( 1 ) 、傘形花內(nèi)酯( um belliferone,2) 、瑞香素( dap</p><p><b>　　2.材料與方法</b></p>&l

62、t;p><b>　　2.1材料與試劑</b></p><p>　　艾葉:購自舟山的一家藥店;石油醚(AR:天津大茂化學(xué)試劑廠);</p><p>　　無水乙醇(AR:湖南匯虹試劑有限公司);</p><p>　　濃硫酸(AR:湖南省株州開發(fā)區(qū)石化玻璃有限責(zé)任公司試劑廠);</p><p>　　苯酚(AR:長沙市湘科

63、精細化工廠);</p><p>　　葡萄糖(AR:廣州化學(xué)試劑廠);</p><p>　　三氯甲烷(AR:長沙分路口塑料化工廠);</p><p>　　正丁醇(AR:湖南師大化學(xué)試劑廠)。</p><p>　　標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖溶液 (0.04mg/mL):精確稱取105℃干燥恒重的葡萄糖0.02g，加入適量蒸餾水溶解，定量轉(zhuǎn)移到500mL的容量瓶中

64、，定容到刻度，搖勻，即得到葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液。</p><p>　　苯酚溶液(5%):取苯酚100g，加入鋁片0.1g，NaHCO30.05g，蒸餾收集180℃一182℃餾分。稱取12.5g精制苯酚加入適量水溶解后轉(zhuǎn)移至250mL容量瓶中定容，置冰箱內(nèi)備用。</p><p><b>　　2.1.1儀器設(shè)備</b></p><p>　　電熱恒溫水浴箱

65、(上海浦東物理光學(xué)儀器廠);101一ZAB型電熱鼓風(fēng)干燥箱(天津市泰斯特儀器有限公司);四兩裝高速中藥粉碎機(武義縣屹立工具有限公司);隊2104伽)系列電子天平(上海民橋精密科學(xué)儀器有限公司);200分光光度計(尤尼柯(上海)儀器有限公司);RE52一05旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器(上海亞榮生化儀器廠);FT-IR360紅外光譜儀(美國尼高力公司);SHB一m循環(huán)水式多用真空泵(鄭州長城科工貿(mào)有限公司)</p><p><

66、;b>　　2.1.2研究內(nèi)容</b></p><p>　　2.1.2.1艾葉粗多糖提取的工藝流程</p><p>　　艾葉經(jīng)50℃烘干粉碎后，過80目篩，精確稱取一定量艾葉粉加一定量蒸餾水，用頻率為 20KHz的超聲波處理，水浴浸提多糖，然后于4000r/min離心10min，棄沉淀，上清液在 0.095MPa，60℃下濃縮至原體積的l/5，再將濃縮液與預(yù)冷4℃的95%乙

67、醇按1:3(V/V)混合以沉淀多糖，置4℃冰箱里過夜后，在4000r/min下離心10min，棄上清液，沉淀中加 50mL蒸餾水使其重新溶解，按1.1加入sevag試劑即(正丁醇 ):(CHC13)=l:5脫蛋白，4000r/min下離心10min，冷凍干燥上層的糖液，得粗多糖。</p><p>　　2.1.2.2糖浸提過程中的單因素實驗</p><p>　　超聲波處理與水浸提是粗多糖提取

68、的關(guān)鍵步驟，為此，選擇浸提過程中的溫度、超聲波處理時間、總浸提時間和液料比(w/w)為因素，研究各因素下浸提液中的多糖提取率。</p><p>　　2.1.2.3多糖浸提過程中最佳工藝條件的確定</p><p>　　在單因素實驗的基礎(chǔ)上選擇各個因素的3個水平進行L9(34)正交實驗，以優(yōu)化浸提過程的工藝條件。</p><p>　　2.1.2.4多糖浸提最佳工藝條件驗

69、證實驗</p><p>　　在正交實驗確定的最佳工藝條件下進行放大實驗，以驗證粗多糖浸提過程中工藝條件的可靠性。</p><p><b>　　2.1.3測定方法</b></p><p>　　2.1.3.1測定葡萄糖含量的標(biāo)準(zhǔn)曲線制作:苯酚一一硫酸法[4]</p><p>　　測得標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程為:</p>

70、<p>　　C=74.97A+4.5394 r=0.9993</p><p>　　其中:x為葡萄糖含量(μg);A為波長為490nm下的吸光度。</p><p>　　2.1.3.2艾葉粗多糖含量與葡萄糖含量間的換算因子的計算</p><p>　　精確稱取 20mg自制艾葉粗多糖用少量50℃熱水完全溶解后，用蒸餾水定容至100mL。吸0.5mL糖

71、液加1.5mL的蒸餾水，另吸2mL蒸餾水作空白對照;向2管內(nèi)各加人1mL6%苯酚和5mL濃H2SO4;靜置10而n后，于40℃水浴加熱30min，冷卻后于49Onm下測吸光度A，代人標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程得粗多糖相當(dāng)于葡萄糖含量（μg)，按下式計算艾葉粗多糖與葡萄糖之間的換算因子F:</p><p>　　F==W/(C*D)</p><p>　　式中w，為稱取粗多糖的質(zhì)量（μg），D為粗多糖稀釋

72、倍數(shù)(實驗中D一200)，求得F為2.15。</p><p>　　2.1.3.3粗多糖提取率的計算方法</p><p>　　粗多糖提取率(%)=【C*D*F//W0*106】*100</p><p>　　式中:C為粗多糖浸提液通過苯酚一硫酸法測定A值再從回歸方程求得的粗多糖相當(dāng)于葡萄糖的含量（μg）;D為稀釋倍數(shù);F為換算因子;W為艾葉干粉重量(g)。</p&

73、gt;<p>　　2.1.3.4粗多糖得率的計算</p><p>　　粗多糖得率(%)二(W2/W0)*100</p><p>　　其中W2為制得的艾葉粗多糖質(zhì)量(g)，W0為艾葉干粉質(zhì)量(g)。</p><p><b>　　2.2結(jié)果與分析</b></p><p>　　2.2.1超聲波處理時間對粗多糖提取

74、率的影響</p><p>　　圖1 超聲波時間對多糖提取率的影響</p><p>　　稱取5份艾葉粉末，每份2g，分別放人燒杯并編號。各按液料比為35:1加入 70mL蒸餾水，依次用超聲波破碎細胞25，30，35，40，45min后，置于80℃水浴保溫浸提多糖，總浸提時間為120min。各浸提液經(jīng)離心得上清液，浸提液通過苯酚一硫酸法測定A值，每份做3個平行樣，結(jié)果見圖1。再經(jīng)濃縮、乙醇沉

75、淀、再溶解、Sevag試劑脫蛋白、再離心后，苯酚一硫酸法測定上清液的A值并換算成粗多糖提取率。</p><p>　　圖1顯示，超聲波處理時間對艾葉粗多糖提取率影響較為顯著，處理 40min時粗多糖提取率最大。其他的處理時間下粗多糖提取率顯著下降。超過 40min，粗多糖提取率下降可能是隨著時間增加，超聲波的機械剪切作用導(dǎo)致部分多糖降解。因此，用超聲波處理多糖浸提液的時間以40min為宜。</p>&

76、lt;p>　　圖2 浸提溫度對粗多糖提取率的影響</p><p>　　2.2.2浸提溫度對粗多糖提取率的影響</p><p>　　稱取5份艾葉粉末，每份2g，分別放入燒杯并編號。各按液料比為35:l加入 70mL蒸餾水，超聲波4〔，min，浸提溫度分別為60，70，80，90，I000C，浸提時間為120min。各浸提液的后續(xù)處理同2.2.1。結(jié)果見圖2。</p>

77、<p>　　圖2顯示，浸提溫度對艾葉粗多糖提取率影響顯著。80℃時，粗多糖提取率最大。溫度增加，溶解度增大，有利于多糖的溶出，但隨著溫度的，部分多糖水解為單糖或低聚糖，并且易使蛋白質(zhì)變性，若艾葉多以糖蛋白形式存在必然導(dǎo)致提取率下降，在實驗中也顯示高</p><p>　　于80℃抽提的液用Sevag試劑脫蛋白時沉淀明顯增加，沉淀上現(xiàn)了一些黃色的膠狀物質(zhì)，推測艾葉多糖確實蛋白或蛋白多糖形式存在。因此，多糖浸

78、提過程浸提溫度80℃為宜。</p><p>　　2.2.3總浸提時間對粗多糖提取率的影響</p><p>　　稱取5份艾葉粉末，每份2g，按液料比為30:1加入60mL蒸餾水，超聲波巧min粉碎細胞，置于85℃水浴保溫浸提多糖，浸提時間分別為60，90，120，150， 180min。各浸提液的后續(xù)處理同2.2.1結(jié)果見圖3。</p><p>　　圖3 總提取時

79、間對粗多糖提取率的影響</p><p>　　圖3顯示，總浸提時間對粗多糖提取率的影響較大。當(dāng)總提取時間為 150min時，粗多糖提取率最高，時間大于 150min時粗多糖提取率下降。原因可能是由于條件下浸提溫度較高(80℃)，處理時間過長會使糖中的糖蛋白組分緩慢變性析出，導(dǎo)致粗多糖提下降。實驗中也顯示隨著總的浸提時間增加，用sevag法脫蛋白時產(chǎn)生的沉淀也增加。因此，多糖總浸提時間以 150min為宜。</

80、p><p>　　2.2.4液料比對粗多糖提取率的影響</p><p>　　稱取5份艾葉粉末，每份2g，放人燒杯并編號。按體積比為20:l，25:1，30:l，35:l，40:1依次加入40，50，60，70， 80mL蒸餾水，超聲波巧min，置于80℃水浴浸提 120min。各浸提液的后續(xù)處理同2.2.1，結(jié)果見圖4。</p><p>　　圖4 料液比對粗多糖提取率的

81、影響</p><p>　　圖4顯示，（圖中料液比分別為20:1；25:1；30:1；35:1；40:1）液料比對粗多糖提取率的影響較為顯著，液料比為35:1時，粗多糖提取率最大。增加液料比有利于粗多糖的溶出，但太大時使后續(xù)濃縮時間明顯增加，加上濃縮是在較高溫度下(80℃)進行，容易使粗多糖中的糖蛋白變性并在脫蛋白時析出，導(dǎo)致粗多糖提取率下降。因此，多糖浸提的液料比以35:1為宜。</p><p

82、>　　2.2.5多糖浸提過程中最佳工藝條件的確定</p><p>　　根據(jù)單因素試驗結(jié)果，選擇上述各因素的3水平進行L3(34)正交實驗，因素與水平的設(shè)計見表l。</p><p>　　稱取9份艾葉粉末，每份2g，放人燒杯并編號，各試驗號按表2設(shè)計的浸提條件對艾葉進行浸提。各浸提液的后續(xù)處理同2.2.1，以吸光度考察指標(biāo)進行極差分析，結(jié)果見表2。</p><p>

83、;<b>　　表2正交實驗結(jié)果</b></p><p>　　表2顯示，在考察的4個因素中，對粗多糖提取率影響最顯著的是浸提溫度，超聲波處理時間次之，液料比再次之，總浸提時間對提取率影響最小;浸提過程的佳工藝條件為A2B3C1D2，即:浸提溫度80oC、浸提時間150min、超聲波作用35min，液料比為30:l。</p><p>　　比較多糖浸提過程的單因素試驗與正交

84、試驗的果，可發(fā)現(xiàn)2種試驗確定的工藝條件有所差異。單因素素試驗顯示浸提溫度為80℃、浸提時間為150min粗多糖提取率最大;而正交實驗結(jié)果顯示浸提溫度為80℃、浸提時間為4h粗多糖提取率最大。表明浸提度與浸提時間之間</p><p>　　存在著相互影響，即當(dāng)浸提溫度增加，浸提時間應(yīng)相應(yīng)減少;浸提溫度降低，浸提時間可適當(dāng)增加。這也從另一側(cè)面證實了艾葉多糖中確實含有對溫度較為敏感的糖蛋白。</p><

85、;p>　　2.2.6最佳浸提條件的驗證及放大試驗</p><p>　　稱取艾葉粉末25g，加進1000mL蒸餾水，超聲波破碎細胞40min后置于80℃中水浴，總浸提時間為2h，各浸提液的后續(xù)處理同實驗4.2.1，苯酚一硫酸法測定上清液的A值并換算成粗多糖提取率為6.43%，高于正交試驗的結(jié)果，說明試驗中得出的工藝條件是可靠的。將該粗多糖抽提液冷凍干燥得艾葉粗多糖，得率約為6.13%。</p>

86、<p><b>　　3材料和方法</b></p><p>　　3.1材料、試劑與儀器</p><p>　　纖維素酶：北京奧博星生物公司；無水乙醇、大孔陰離子交換樹脂D315、活性炭：天津市化學(xué)試劑廠。</p><p>　　SIGMA 3K-15臺式離心機：德國Sigma公司;RE-3000型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀：上海亞榮生化儀器廠；722型可見

87、分光光度計：上海精密科學(xué)儀器有限公司。</p><p>　　3.2 多糖分離工藝流程</p><p>　　艾葉→粉碎→酶法處理→水浴浸提→過濾→離心→濃縮→ Sevage 法除蛋白→脫色→醇沉→粗多糖→純化</p><p><b>　　3.3 多糖脫色</b></p><p>　　利用大孔陰離子交換樹脂D315、活性炭、

88、次氯酸鈉和過氧化氫對艾葉多糖進行脫色。利用分光光度計在470nm 波長處測定多糖溶液脫色前后的吸光度，并計算脫色率，比較各脫色劑的脫色效果。</p><p>　　脫色前吸光度－脫色后吸光度</p><p>　　脫色率(%)= ——————————————× 100</p><p><b>　　脫色前吸光度</b></p>

89、<p>　　3.3.1 活性炭脫色</p><p>　　分別量取5.00ml 脫蛋白后的多糖溶液置于各試管中，分別加入0.2、0.3、0. 4、0.5、0.6 g 粉末狀活性炭，混勻后，45℃恒溫水浴1h， 4000r/min 離心10min，將活性炭殘渣去除，兩層濾紙抽濾兩次后，保留濾液觀察顏色變化并測定各管中溶液的吸光度及多糖含量。</p><p>　　3.3.2 次氯酸鈉

90、脫色</p><p>　　分別量取5.00ml 多糖溶液置于各試管中，分別加入2.0、2.5、3. 0、3.5、4. 0ml 次氯酸鈉溶液，混勻后，45℃恒溫水浴30min，水浴中產(chǎn)生沉淀， 4000r/min 離心10min，將沉淀去除，保留上層溶液，觀察顏色變化并測定各管中溶液的吸光度及多糖含量。</p><p>　　3.3.3 過氧化氫脫色</p><p>　

91、　分別精密量取5.00ml 多糖溶液置于各試管中，分別加入1.0、2.0、3.0、4.0、5.0ml 過氧化氫溶液，混勻后，45℃恒溫水浴1h，觀察顏色變化并測定各管中溶液的吸光度及多糖含量。</p><p>　　3.3.4 大孔陰離子交換樹脂D315 脫色</p><p>　　樹脂的預(yù)處理：取一定量干樹脂用水浸泡2h 后減壓去氣泡，再用大量去離子水洗至澄清；去水后加4 倍量2mol/L

92、HCL攪抖4h，除去酸液，水洗至中性；再加4 倍量2mol /L NaOH 攪拌4h，除堿液，水洗至中性備用。</p><p>　　分別精密量取5.00mL多糖溶液置于各試管中，分別加入1.0、1.5、2.0、2.5、3.0g 預(yù)處理好的大孔陰離子交換樹脂D31 5 ，混合均勻后，4 5℃恒溫水浴2 h ，抽濾去除樹脂殘渣，保留濾液觀察顏色變化并測定各管中溶液的吸光度及多糖含量。</p><p

93、>　　3.4 多糖保留率的測定</p><p>　　3.4.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立</p><p>　　精確稱取105℃干燥至恒重的葡萄糖20mg，加蒸餾水溶解定容至500mL容量瓶，即得到濃度為0.04mg/mL的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液，分別吸取0 . 0 、0 . 2 、0 . 4 、0 . 6 、0.8、1.0、1.2、1.4、1.6mL的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液，置于50ml比色管中，各加水補至2m

94、l，加入6% 苯酚1mL，搖勻，迅速滴加濃硫酸5mL，放置5min，60℃水浴20min，迅速冷卻至室溫，于490nm 波長處測吸光度，作標(biāo)準(zhǔn)曲線，得標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程。</p><p>　　3.4.2 換算因子的測定</p><p>　　精確稱取干燥至恒重的艾葉多糖粉末4mg 溶于水，定容至50mL。吸取上述溶液1.0mL，按苯酚硫酸法測定其在490nm 波長處的吸光度[5]，計算出此多糖

95、中葡萄糖的濃度，按式(1 )計算出換算因子F。 m</p><p>　　F= ——— (1)</p><p><b>　　C × D</b></p><p>　　式中：m 為多糖質(zhì)量(mg)；C 為多糖中葡萄糖的濃度(mg/mL)

96、；D 為多糖的稀釋倍數(shù)。</p><p>　　3.4.3 苯酚- 硫酸法測定多糖含量</p><p>　　分別測定艾葉多糖原液及不同脫色方法脫色后溶液的吸光度。通過標(biāo)準(zhǔn)曲線和式(2)計算樣品中多糖的百分含量。 C×D×F</p><p>　　多糖含量(%)= —————— (2

97、)</p><p><b>　　m</b></p><p>　　式中：C 為樣品液中葡萄糖的濃度(mg/mL )；D 為樣品液的稀釋倍數(shù)；F 為換算因子；m 為樣品的質(zhì)量(mg )。</p><p>　　3.4.4 多糖保留率測定</p><p><b>　　M后</b></p>&l

98、t;p>　　多糖保留率(%)= —— ×100 (3)</p><p><b>　　M前</b></p><p>　　式中：M 前為脫色前的多糖含量；M 后為脫色后的多糖含量。</p><p><b>　　3.5 多糖抑菌性</b></p&

99、gt;<p>　　在超凈工作臺上，用移液器分別吸取各種菌懸液200μL，均勻涂布在平皿培養(yǎng)基上。每皿中放置3 個無菌牛津杯。取不同脫色劑脫色后的多糖溶液，加入標(biāo)有記號的牛津杯，重復(fù)三次。置生化培養(yǎng)箱，3 7 ℃培養(yǎng)細菌2 4 h 。然后測定抑菌圈直徑，計算平均值[ 6 ]。</p><p><b>　　4 結(jié)果與分析</b></p><p>　　4.1

100、多糖脫色率分析</p><p>　　4.1.1 活性炭脫色</p><p>　　由圖5可知，多糖溶液的吸光度隨活性炭添加量的增大而減小。當(dāng)活性炭添加量大于0.08g/mL時，吸光度變化很??；艾葉多糖的脫色率為8 7 . 9%。因此，利用活性炭對艾葉多糖溶液進行脫色的最佳條件為：活性炭添加量0.08g/ml，脫色溫度45℃，脫色時間1h。</p><p>　　圖5

101、活性炭脫色效果</p><p>　　4.1.2 次氯酸鈉脫色</p><p>　　圖6 次氯酸鈉脫色效果</p><p>　　由圖6可知，次氯酸鈉對艾葉多糖溶液的脫色效果很明顯。當(dāng)添加次氯酸鈉的體積比為0.6 時，多糖溶液的脫色效果比較好，脫色率達到87.4%。當(dāng)添加次氯酸鈉的體積比超過0.6 以上時，脫色率增加很小。因此，次氯酸鈉溶液對艾葉多糖溶液進行脫色的最佳

102、條件為：添加次氯酸鈉的體積比0.6，脫色溫度45℃，脫色時間30min。</p><p>　　4.1.3 過氧化氫溶液添加量與多糖溶液吸光度值關(guān)系</p><p>　　圖7 過氧化氫脫色效果</p><p>　　由圖7可知，過氧化氫對艾葉多糖溶液的脫色效果也很明顯。添加過氧化氫的體積比為0.8 時，吸光度為0.556，脫色率為84.0%，脫色效果好。因此，過氧化氫

103、脫色的最佳條件為：添加過氧化氫的體積比為0 . 8 ，脫色溫度4 5 ℃，脫色時間1 h 。</p><p>　　4.1.4 大孔陰離子交換樹脂D315 脫色效果</p><p>　　圖8 樹脂D315 脫色效果</p><p>　　由圖8可知，艾葉多糖溶液的吸光度隨大孔陰離子交換樹脂D315 添加量的增大而減小。當(dāng)添加量為0.5g/ml 時，多糖溶液的吸光度為0.

104、578，脫色率為83.4%；添加量達到0.6g/mL時，吸光度變化很小，脫色率保持不變。因此，采用大孔陰離子交換樹脂D315 進行脫色的最佳脫色條件為：D315 添加量0.5g/mL，脫色溫度45℃，脫色時間2 h 。</p><p>　　4.2 多糖保留率分析</p><p>　　4.2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線與換算因子</p><p>　　圖9 葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線</p

105、><p>　　配制葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液，利用722 分光光度計在490nm波長處測定吸光度。繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(圖9)，計算得到標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程：Y=0.0066X+0.0062，r2=0.9991，表明葡萄糖在8.0～64μg/mL范圍內(nèi)很好的符合郎伯- 比爾定律。按苯酚硫酸法測定，艾葉多糖在490nm 波長處的吸光度為0.100，由回歸方程得多糖含量為14.21μg/mL，計算得換算因子F=1.59。</p>&

106、lt;p>　　4.2.2 多糖保留率的測定</p><p>　　多糖保留率按1. 4 節(jié)公式進行計算。采用活性炭、次氯酸鈉、過氧化氫和樹脂D315 脫色后，艾葉多糖的保留率分別為81.5%、50.2%、61.0%、76.6%。結(jié)果表明，活性炭和樹脂D315 脫色的多糖保留率明顯高于次氯酸鈉和過氧化氫脫色的多糖保留率。</p><p><b>　　4.3 抑菌分析</b

107、></p><p>　　表3 脫色后的多糖的抑菌效果</p><p>　　由表3可知，脫色后的艾葉多糖溶液對大腸桿菌、枯草芽孢桿菌、綠膿假單孢菌和痢疾志賀菌等均具有比較好的抑菌效果?；钚蕴亢蜆渲珼315 脫色的多糖溶液的抑菌圈直徑與對照的抑菌圈直徑差別不大，而次氯酸鈉和過氧化氫脫色的多糖溶液的抑菌圈直徑則明顯小于對照。結(jié)果表明，利用活性炭和樹脂D315 對艾葉多糖進行脫色，雖然會損失

108、一小部分多糖，但對其生物活性影響很小，不影響多糖的應(yīng)用。</p><p><b>　　5 討 論</b></p><p>　　5.1 多糖脫色方法</p><p>　　脫色是植物多糖分離過程中的難題之一。由于植物材料不同、實驗室條件不同，脫色方法也不盡相同。嚴慧如等[7]用活性炭對菊芋菊糖進行脫色，發(fā)現(xiàn)活性炭對菊糖吸附較多，效果不理想。李丹丹等

109、[8]利用離子交換樹脂和吸附樹脂對牛蒡菊糖進行脫色，發(fā)現(xiàn)D301-G的脫色效果比較好。夏瑋等[9]認為AB-8 樹脂對桑葉粗多糖溶液的脫色效果比較好。黃純等[ 10]對亮菌多糖進行脫色，發(fā)現(xiàn)過氧化氫的脫色效果比活性炭好。植物來源的多糖所含色素大多是負離子?，F(xiàn)主要采用活性炭吸附法、弱堿樹脂脫色、雙氧水氧化脫色等方法除去粗多糖中的色素，然而這些方法均有一定的局限性?；钚蕴棵撋珪r間長，活性炭難以過濾；雙氧水氧化脫色的效果不太理想，其氧化性有可

110、能破壞多糖的生物活性。大孔吸附樹脂對糖類物質(zhì)吸附能力差，但對色素的吸附能力較強，可將多糖中的色素雜質(zhì)分離出來。新的脫色方法如樹脂、Al 2O3、聚酰胺等，還有新型儀器的使用都為多糖脫色提供了廣闊的前景。</p><p>　　通過比較活性碳、次氯酸鈉、過氧化氫和大孔陰離子交換樹脂D315 對艾葉多糖的脫色效果，發(fā)現(xiàn)四種方法的脫色效果明顯；活性炭和樹脂D315 脫色的多糖保留率遠遠高于次氯酸鈉和雙氧水；活性炭和樹脂D

111、315 脫色的多糖抑菌效果也好于次氯酸鈉和雙氧水脫色的多糖。但活性炭脫色后，溶液中殘留的活性炭很難完全清除，而樹脂可以再生，方法簡單，是較優(yōu)的一種脫色方法。</p><p>　　5.2 艾葉多糖的應(yīng)用前景</p><p>　　抗生素的廣泛使用導(dǎo)致病原菌產(chǎn)生抗藥性。從生物中提取的生理活性物質(zhì)，如多糖、多肽等具有抗菌作用，作為免疫增效劑可補充和替代傳統(tǒng)抗生素的部分作用，可有效減少病原菌的耐藥性

112、。我國艾葉來源豐富，易于采集。艾葉多糖無毒安全，可作為免疫增效劑，也可研制功能食品，具廣闊的研究與開發(fā)前景。</p><p><b>　　6 結(jié) 論</b></p><p>　　對艾葉多糖脫色方法研究表明，活性炭和樹脂D315 的脫色效果比較好，具有較高的多糖保留率，脫色后的多糖抑菌作用比較強，而次氯酸鈉和雙氧水的脫色效果雖比較好，但其多糖保留率低，脫色后的多糖抑菌效

113、果比較差。活性炭脫色時，多糖溶液中會殘留微量的活性炭，很難除去。樹脂脫色方法簡單，且可再生，是優(yōu)先選擇的脫色方法。</p><p><b>　　參考文獻</b></p><p>　　[ 1 ] 中華人民共和國藥基委員會.中國藥典[S].廣州：廣州科技出版社,1995：68</p><p>　　[ 2 ] 張永強,丁偉,趙志模.黃花蒿提取

114、物對朱砂葉螨的生物殺蟲活性研究[J].中國農(nóng)業(yè)科學(xué),2008 ,41(3):720-726</p><p>　　[ 3 ] 梅全喜,高玉橋.艾葉化學(xué)及藥理研究進展[J].中成藥,2006,28(7):1030-1032</p><p>　　[ 4 ] ZAIAJ.MasssPeetrometryofoligosaceharides[J]· MassSPee一 tromR

115、ev，20()4，23(12):161一227.</p><p>　　[ 5 ] 楊勇杰, 姜瑞芝. 苯酚 - 硫酸法測定雜多糖含量的研究[J]. 中成藥,2005, 27 (6): 706-708.</p><p>　　[ 6 ] 何余堂, 杜金艷, 馬春穎. 玉米花粉多糖的抗菌作用研究[J].食品科技, 2008, 33(2): 156-158.</p><p>

116、;　　[ 7 ] 嚴慧如, 黃紹華, 余迎利. 菊糖的提取及純化[J]. 天然產(chǎn)物研究與開發(fā), 2001, 14 (1) : 65- 69.</p><p>　　[ 8 ] 李丹丹, 金征宇. 牛蒡菊糖脫色工藝的研究[J]. 農(nóng)業(yè)工程學(xué)報, 2007,23 (8): 241-244.</p><p>　　[ 9 ] 夏瑋, 呂慶, 張文清, 等. 大孔吸附樹脂脫色桑葉多糖的研究[J].食品