美洲雁源金黃色葡萄球菌β溶血素基因原核表達(dá)和免疫原性分析.pdf_第1頁(yè)
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1、對(duì)采自美洲雁的細(xì)菌菌株的菌體形態(tài)、菌落形態(tài)、培養(yǎng)特性、溶血特性、生化特性、致病力和16s rRNA基因進(jìn)行鑒定，結(jié)果符合金黃色葡萄球菌特征，與參考菌株ATCC14458株16s rRNA基因序列同源性為97％，確定為金黃色葡萄球菌TLJ株。
　　 利用PCR擴(kuò)增了金黃色葡萄球菌TLJ株β溶血素(β-HL)基因，并進(jìn)行了序列分析。結(jié)果β-HL基因長(zhǎng)度為長(zhǎng)993bp的一段序列，與參考株的β-HL基因核苷酸同源性在98.5％～99.8

2、％之間。
　　 構(gòu)建β-HL基因與原核表達(dá)載體pGEX-6p-1重組質(zhì)粒，轉(zhuǎn)化入大腸桿菌BL21(DE3)中，用IPTG誘導(dǎo)，表達(dá)G-β-HL(β-HL融合蛋白)，進(jìn)行SDS-PAGE和WesternBlot分析，分子量約63.4KDa，能與金黃色葡萄球菌陽(yáng)性血清發(fā)生特異性的免疫反應(yīng)。
　　 用G-β-HL和生理鹽水免疫健康雞，四次免疫后，兩組雞同時(shí)用美洲雁源金黃色葡萄球菌TLJ株攻毒，每羽1×108cfu/ml頸部多點(diǎn)

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