亞抑菌濃度β內(nèi)酰胺類藥物對金黃色葡萄球菌α溶血素的表達(dá)調(diào)控作用.pdf

1、目的：
　　探討亞抑菌濃度β內(nèi)酰胺類藥物對金黃色葡萄球菌（Staphylococcus aureus，S.aureus）致病物質(zhì)α溶血素（Alpha hemolysin，Hla）表達(dá)的調(diào)控作用及其調(diào)控機(jī)制。
　　方法：
　?、賹?shí)驗(yàn)金黃色葡萄球菌菌株分別收集于安徽醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科培養(yǎng)臨床標(biāo)本，質(zhì)控菌株選用金黃色葡萄球菌ATCC29213；選擇青霉素、頭孢西丁、頭孢他啶、頭孢唑啉作為β內(nèi)酰胺類代表藥物，肉湯稀釋法

2、分別測定實(shí)驗(yàn)細(xì)菌對選用藥物的最小抑菌濃度（minimal inhibitory concentration，MIC）；
　　②實(shí)驗(yàn)金黃色葡萄球菌菌株經(jīng)過培養(yǎng)8h后，分別收集細(xì)菌與培養(yǎng)上清。熒光定量PCR檢測細(xì)菌α溶血素 mRNA的表達(dá)變化，免疫印跡法檢測細(xì)菌培養(yǎng)上清中α溶血素蛋白的表達(dá)變化，紅細(xì)胞溶血實(shí)驗(yàn)檢測細(xì)菌培養(yǎng)上清中溶血活性的水平變化；
　?、廴〗瘘S色葡萄球菌溶血活性表達(dá)較強(qiáng)的菌株，分別在培養(yǎng)的同時(shí)加入1/8MIC、1

3、/4MIC、1/2MIC亞抑菌濃度的β內(nèi)酰胺類藥物，分為青霉素、頭孢西丁、頭孢他啶和頭孢唑啉作用組；平板菌落計(jì)數(shù)法計(jì)數(shù)繪制生長曲線，每組設(shè)立4h、8h、12h和24h四個(gè)培養(yǎng)觀察時(shí)間點(diǎn)，分別檢測細(xì)菌與培養(yǎng)上清中α溶血素表達(dá)變化，以及細(xì)菌培養(yǎng)上清中溶血活性的水平變化；以未加入藥物培養(yǎng)的細(xì)菌作為正常對照。
　?、軣晒舛縋CR檢測金黃色葡萄球菌轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子AgrA在亞抑菌濃度β內(nèi)酰胺類藥物作用下的表達(dá)變化。
　　結(jié)果：
　

4、?、俨煌瘘S色葡萄球菌菌株之間α溶血素 mRNA轉(zhuǎn)錄水平、上清中的蛋白翻譯水平的表達(dá)量以及培養(yǎng)上清的溶血活性存在差異；
　?、?/8MIC、1/4MIC亞抑菌濃度β內(nèi)酰胺類藥物對金黃色葡萄球菌生長無明顯抑制作用，可顯著上調(diào)細(xì)菌α溶血素的表達(dá)；作用8h后，即可顯著上調(diào)α溶血素mRNA、上清中蛋白的表達(dá)，提高培養(yǎng)上清對紅細(xì)胞的溶血作用；
　?、蹃喴志鷿舛圈聝?nèi)酰胺類藥物對金黃色葡萄球菌作用后，可顯著上調(diào)細(xì)菌轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子AgrA的表