大果沙棘黃酮分離純化及生物活性研究.pdf

1、大果沙棘(Hippophae rhamnoides var.sp),為胡頹子科(Elaeagnaceae)沙棘屬(Hippophae Linn.)。大果沙棘果中含有大量的生物活性物質(zhì),包括黃酮、多酚、胡蘿卜素、有機(jī)酸、脂類等,其主要活性成分沙棘黃酮具有抗氧化、抗衰老、抗腫瘤、保肝、抑菌、保護(hù)心血管系統(tǒng)等多項(xiàng)生理功能。
　　 本文以大果沙棘果渣黃酮為研究對象,系統(tǒng)地研究了其分離提取工藝以及生物活性。采用酶輔助法對大果沙棘果渣中的黃

2、酮進(jìn)行提取,確定了最佳提取工藝條件,獲得大果沙棘黃酮提取物。對大果沙棘黃酮的分離純化進(jìn)行研究,優(yōu)化大孔吸附樹脂吸附分離大果沙棘黃酮的工藝條件。采用多種方法研究了大果沙棘黃酮的抗氧化活性,并對其抗疲勞、降血脂和抗腫瘤活性及其相關(guān)作用機(jī)理進(jìn)行研究。本研究的主要內(nèi)容如下:
　　 1、對大果沙棘果渣中化學(xué)成分進(jìn)行分析,測定了其中的水分、灰分、總蛋白、粗脂肪、多糖、黃酮、多酚等主要化學(xué)成分的含量。
　　 2、采用酶輔助法對大果沙棘

3、果渣中黃酮的提取工藝進(jìn)行研究,利用單因素試驗(yàn)和響應(yīng)面試驗(yàn)優(yōu)化大果沙棘黃酮的提取工藝,確定最佳提取工藝條件為:纖維素酶用量0.85mg/mL,酶解溫度50.9℃,pH值5.1,酶解時間2h,提取溫度50℃,液固比值20,乙醇體積分?jǐn)?shù)71.4％,提取時間2h,大果沙棘果渣黃酮的得率為8.98mg/g。
　　 3、對大果沙棘黃酮的分離純化條件進(jìn)行研究,考察了七種不同大孔樹脂對大果沙棘黃酮靜態(tài)和動態(tài)吸附及解吸效果,X-5大孔吸附樹脂對大

4、果沙棘黃酮吸附分離效果最好。并通過X-5大孔樹脂柱研究了上樣濃度、pH值、洗脫劑濃度、洗脫體積對黃酮回收率的影響。X-5樹脂柱吸附分離大果沙棘黃酮的最佳條件為:大果沙棘提取液上樣濃度為2mg/ml,吸附時間2h,用4BV蒸餾水洗脫除去雜質(zhì),然后用4BV70％乙醇洗脫,黃酮回收率為86.78％,純度為54.1％。
　　 4、系統(tǒng)地研究了大果沙棘粗提黃酮和純化黃酮的體外抗氧化能力,考察了其總抗氧化能力和對超氧陰離子、羥基自由基、DP

5、PH和ABTS自由基的清除能力。并與蘆丁和兒茶素標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行對比,進(jìn)而確定大果沙棘黃酮的抗氧化效果。
　　 5、以昆明小鼠為實(shí)驗(yàn)動物,研究大果沙棘黃酮及其與西洋參、紅景天、二十八烷醇復(fù)合制劑的抗疲勞作用。通過小鼠爬桿實(shí)驗(yàn)和負(fù)重游泳實(shí)驗(yàn),研究大果沙棘及其復(fù)合制劑對小鼠的運(yùn)動能力和運(yùn)動后體內(nèi)血乳酸、尿素氮、肝糖原和肌糖原含量的影響,研究大果沙棘復(fù)合制劑對小鼠的抗疲勞作用。
　　 6、研究了大果沙棘黃酮的體內(nèi)降血脂功能。以Wis

6、tar大鼠為實(shí)驗(yàn)動物,建立大鼠高血脂癥模型,考察了大果沙棘黃酮對高血脂大鼠的血脂水平、脂代謝相關(guān)酶活性和抗動脈硬化指數(shù)及體內(nèi)抗氧化的影響,研究大果沙棘黃酮降血脂功能和抗動脈硬化作用。
　　 7、研究大果沙棘黃酮的體外抗腫瘤作用。選用人肝癌HepG2、人結(jié)腸癌HT29和人乳腺癌MCF-7三種腫瘤細(xì)胞株為研究對象。采用MTT比色法研究了不同濃度的大果沙棘黃酮對人肝癌HepG2、人結(jié)腸癌HT29和人乳腺癌MCF-7三種腫瘤細(xì)胞增值的抑

7、制作用,比較對三種腫瘤細(xì)胞抑制效果。
　　 8、研究大果沙棘黃酮體外抗腫瘤作用機(jī)理。采用流式細(xì)胞儀檢測大果沙棘黃酮對HepG2腫瘤細(xì)胞周期變化和細(xì)胞凋亡情況;采用單細(xì)胞凝膠電泳和DNA Ladder檢測對腫瘤細(xì)胞DNA損傷的影響;并通過免疫組化法檢測腫瘤細(xì)胞Bcl-2蛋白和Bax蛋白的表達(dá)和通過測定細(xì)胞Caspase-3酶活力研究對大果沙棘黃酮對腫瘤細(xì)胞抑制作用分子機(jī)制。研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)大果沙棘黃酮可抑制三種腫瘤細(xì)胞生長,促進(jìn)細(xì)胞凋