RNAi抑制絨山羊FGF5基因表達(dá)的研究.pdf

1、絨山羊所產(chǎn)山羊絨是天然的纖維資源，是一種高檔的紡織原料，具有較高的經(jīng)濟(jì)價(jià)值。絨長(zhǎng)度、毛長(zhǎng)度和絨毛細(xì)度是絨山羊的重要經(jīng)濟(jì)性狀，決定絨纖維的價(jià)格和絨毛品質(zhì)。許多研究發(fā)現(xiàn)FGF5基因參與毛囊生長(zhǎng)發(fā)育調(diào)控，從而影響被毛形態(tài)。目前還沒有絨山羊FGF5基因敲除的報(bào)道，而且絨山羊的FGF5基因缺失后被毛是否會(huì)顯著生長(zhǎng)仍然是一個(gè)懸而未決的問(wèn)題。本研究從家畜育種角度出發(fā)，把能夠干擾抑制FGF5基因表達(dá)的RNAi載體導(dǎo)入絨山羊體細(xì)胞，利用體細(xì)胞克隆技術(shù)創(chuàng)造

2、出缺失FGF5基因的絨山羊，進(jìn)而選育出產(chǎn)絨性能優(yōu)良的絨山羊新品系。
　　首先體外培養(yǎng)內(nèi)蒙古絨山羊胎兒皮膚成纖維細(xì)胞，同時(shí)合成干擾FGF5基因表達(dá)的pGCsilencerTM U6/Neo/GFP/ RNAi載體，脂質(zhì)體介導(dǎo)RNAi載體轉(zhuǎn)染絨山羊胎兒成纖維細(xì)胞，GFP和G418篩選表達(dá)綠色熒光的轉(zhuǎn)基因細(xì)胞，RT-PCR檢測(cè)轉(zhuǎn)基因細(xì)胞中FGF5基因的表達(dá)，將FGF5表達(dá)量顯著降低的轉(zhuǎn)基因細(xì)胞作為核供體，移入成熟、去核的絨山羊卵母細(xì)胞中

3、，得到克隆胚胎，進(jìn)一步篩選綠色熒光胚胎移植到受體絨山羊子宮內(nèi)，觀察絨山羊受孕情況。
　　實(shí)驗(yàn)結(jié)果：體外成功培養(yǎng)絨山羊胎兒皮膚成纖維細(xì)胞，經(jīng)G418篩選得到表達(dá)綠色熒光的轉(zhuǎn)FGF5 RNAi載體的細(xì)胞，轉(zhuǎn)基因細(xì)胞個(gè)體變大、形態(tài)不規(guī)則、生長(zhǎng)速度降低，經(jīng)胰蛋白酶消化后迅速貼壁，與對(duì)照組比較有顯著性差異。經(jīng)RT-PCR檢測(cè)，轉(zhuǎn)基因細(xì)胞中FGF5基因的表達(dá)與對(duì)照組比較有顯著性差異。體細(xì)胞核移植獲得轉(zhuǎn)基因熒光克隆胚胎，胚胎移植后受體羊沒有妊娠