阿爾巴斯絨山羊FGF5基因敲除的研究.pdf

1、FGF5基因的突變可導(dǎo)致多種哺乳動物毛囊生長期的延長以及毛被長度的顯著增加，提示可以通過抑制該基因的表達(dá)提高阿爾巴斯絨山羊的產(chǎn)絨量。本研究旨在通過基因敲除的方式建立轉(zhuǎn)基因體細(xì)胞系，并以該細(xì)胞系為核供體進(jìn)行體細(xì)胞核移植，生產(chǎn)敲除 FGF5基因的克隆絨山羊。
　　首先，以組織塊貼壁法原代培養(yǎng)獲得的阿爾巴斯絨山羊胎兒皮膚成纖維細(xì)胞生長狀態(tài)良好，可用于基因打靶和體細(xì)胞核移植。
　　其次，轉(zhuǎn)染后經(jīng)正負(fù)篩選共獲得51個細(xì)胞克隆，擴(kuò)繁后最

2、終凍存12個克隆。提取基因組 DNA進(jìn)行 PCR擴(kuò)增鑒定得到5個陽性克隆，再提取總 RNA進(jìn)行 RT-PCR鑒定后確定其中4個為陽性。與普通成纖維細(xì)胞相比，所得敲除 FGF5基因陽性細(xì)胞克隆在細(xì)胞形態(tài)、性狀及生長特性等方面均發(fā)生了極其顯著的變化：細(xì)胞體積增大；邊界模糊，立體感降低；生長速率明顯下降；胰蛋白酶消化所需時間明顯增加。
　　以轉(zhuǎn)基因陽性細(xì)胞克隆為核供體，體外培養(yǎng)成熟的山羊卵母細(xì)胞為核受體進(jìn)行體細(xì)胞核移植，形成的重構(gòu)胚可發(fā)