294個(gè)稻瘟病菌轉(zhuǎn)錄因子基因的敲除和功能分析.pdf

1、稻瘟病(riceblast)是嚴(yán)重危害水稻的病害之一，造成了水稻產(chǎn)量的嚴(yán)重?fù)p失。稻瘟病(Magnaportheoryzae)是一種絲狀子囊真菌，除水稻外，稻瘟病菌還可以侵染如小麥、大麥，玉米等多種禾本科植物。稻瘟病菌70-15菌株全基因組序列測(cè)序已于2002年10月完成，為深入研究稻瘟病菌的致病機(jī)理和發(fā)育機(jī)制提供了堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)。
　　 稻瘟病菌的基因表達(dá)受多級(jí)調(diào)控，而轉(zhuǎn)錄水平的調(diào)控是基因表達(dá)過程的第一步，也是最重要的一步。轉(zhuǎn)錄因子

2、是基因表達(dá)調(diào)控的關(guān)鍵因子。通過基因敲除方法，將轉(zhuǎn)錄因子基因敲除，觀察缺失該轉(zhuǎn)錄因子后，稻瘟病菌的表型及致病性變化，是一種研究基因功能的有效手段。一個(gè)轉(zhuǎn)錄因子可以調(diào)控多個(gè)靶基因，一個(gè)基因也同時(shí)受到多個(gè)轉(zhuǎn)錄因子的調(diào)控，從而形成復(fù)雜的基因表達(dá)網(wǎng)絡(luò)調(diào)控機(jī)制，因而僅對(duì)少數(shù)幾個(gè)轉(zhuǎn)錄因子的研究已不能滿足需要。本文通過敲除大量轉(zhuǎn)錄因子基因，為研究稻瘟病菌的基因功能以信號(hào)傳導(dǎo)通路，代謝調(diào)節(jié)網(wǎng)絡(luò)提供技術(shù)支持。
　　 對(duì)bHLH、bZIP、HMG、H

3、omeodomain及鋅指基序等5個(gè)疑似轉(zhuǎn)錄因子家族的294個(gè)基因進(jìn)行了基因敲除研究:成功構(gòu)建了277個(gè)基因的敲除載體;通過ATMT轉(zhuǎn)化方法對(duì)稻瘟病菌進(jìn)行轉(zhuǎn)錄因子基因敲除實(shí)驗(yàn)，獲得171個(gè)轉(zhuǎn)錄因子基因的敲除突變體。
　　 在171個(gè)轉(zhuǎn)錄因子基因敲除突變體中，測(cè)定了167個(gè)基因的突變子表型，發(fā)現(xiàn)49個(gè)基因的敲除影響到稻瘟菌的生長(zhǎng)、產(chǎn)孢、致病性:其中9個(gè)基因影響生長(zhǎng)速度，24個(gè)基因影響產(chǎn)孢，16個(gè)基因影響致病性，說明這些轉(zhuǎn)錄因子在稻