平沙綠僵菌侵染規(guī)律及影響其定殖的環(huán)境因子研究.pdf

1、中國(guó)素有“竹子王國(guó)之稱”，目前有竹子500多種，720多萬(wàn)hm2，竹子種類、種植面積均居世界前列。浙江省的竹業(yè)產(chǎn)值位居全國(guó)第一，是竹產(chǎn)區(qū)的主要經(jīng)濟(jì)支柱之一。近年來(lái)，由于農(nóng)糠覆蓋等技術(shù)的應(yīng)用和耕作模式的改變，致使金針蟲在竹產(chǎn)區(qū)大面積發(fā)生，有的地區(qū)危害非常嚴(yán)重，竹筍的產(chǎn)量和質(zhì)量得不到保障，帶來(lái)了嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失，金針蟲的危害成為制約浙江省竹產(chǎn)業(yè)發(fā)展的瓶頸。由于金針蟲是土棲害蟲，所以防治難度大，加之市場(chǎng)對(duì)農(nóng)產(chǎn)品農(nóng)藥低毒性、低殘留的限制，很多高效

2、農(nóng)藥已被禁用，因此生物防治顯得尤為重要。本文以從篩胸梳爪叩甲幼蟲（Melanotuscribricollis）僵蟲體內(nèi)分離的平沙綠僵菌（Metarhiziumpingshaense）為研究對(duì)象，研究了該菌株對(duì)金針蟲侵染過(guò)程的電鏡觀察、大規(guī)模固體發(fā)酵以及在土壤中定殖的影響因素，研究結(jié)果如下:
　　 1.通過(guò)對(duì)不同侵染部位進(jìn)行掃描電鏡觀察結(jié)果表明:分生孢子分布密度最大的部位是胸足的節(jié)間膜、足末端等處;其次分布在毛孔、溝、縫等角質(zhì)層相

3、對(duì)薄弱的部位，例如腹部的節(jié)間膜、褶餡處，蟲體的光滑堅(jiān)硬部位孢子的分布量很少。
　　 2.平沙綠僵菌侵染金針蟲過(guò)程的掃描電鏡觀察結(jié)果表明:接種后12h，孢子萌發(fā)產(chǎn)生芽管;接種后18h，孢子的芽管生長(zhǎng);接種后24h，芽管繼續(xù)生長(zhǎng)，長(zhǎng)度小于孢子長(zhǎng)徑，末端膨大形成附著胞;30～36h時(shí)，孢子芽管進(jìn)一步伸長(zhǎng)，長(zhǎng)度大約為孢子長(zhǎng)徑的兩倍，在褶餡處可見(jiàn)芽管或附著胞穿透體壁并向金針蟲體內(nèi)生長(zhǎng);36～96h，侵入金針蟲體腔的菌絲，吸收蟲體內(nèi)的營(yíng)養(yǎng)物

4、質(zhì)，菌絲大量繁殖，直至體腔內(nèi)完全被菌絲充滿，最后突破表皮，最先在足間窩處、節(jié)間膜長(zhǎng)出白色菌絲;接種后120h，蟲體表面布滿墨綠色分生孢子。
　　 3.平沙綠僵菌侵染金針蟲的透射電鏡觀察表明，接種后12～30h，觀察到少量菌絲段侵入到表皮中;此時(shí)金針蟲由于受到外界不利環(huán)境的刺激，節(jié)間膜擠壓，與此同時(shí)核膜加厚，染色質(zhì)凝聚以抵御外界的侵染;侵染后30h以內(nèi)，雖然少量菌絲已侵入表皮，但金針蟲的細(xì)胞器仍保持完整，內(nèi)部結(jié)構(gòu)相對(duì)穩(wěn)定;侵染后6

5、4h，菌絲侵入金針蟲的脂肪體內(nèi)，金針蟲的脂肪體內(nèi)充滿大量的菌絲段和孢子;侵染后96h，核糖體開始脫落，細(xì)胞器嚴(yán)重破壞，直至核糖體完全脫落，細(xì)胞器空泡化。
　　 4.設(shè)置不同培養(yǎng)基載體、培養(yǎng)基體積、培養(yǎng)基濕度、接種量、培養(yǎng)容器等因素對(duì)綠僵菌生長(zhǎng)和產(chǎn)孢量進(jìn)行研究。結(jié)果表明，稻殼和蛭石均可作為固態(tài)發(fā)酵的優(yōu)良載體，大米、麥麩、玉米粉相互組合是該菌發(fā)酵的良好營(yíng)養(yǎng)源，與不同載體組合產(chǎn)孢量均達(dá)到2.7×109孢子/g以上，其中以大米和稻殼體積

6、比為1∶2時(shí)產(chǎn)孢量最大，為58×109孢子/g;最佳接種量為10％（ml/g）;培養(yǎng)基質(zhì)的相對(duì)濕度為70％;固態(tài)發(fā)酵周期為14d;培養(yǎng)基質(zhì)裝入量為1/2培養(yǎng)瓶。
　　 5.采集早園竹林覆蓋地和非覆蓋地土壤，以及黃泥土、黑壤土和砂土等不同質(zhì)地土壤，在不同土壤質(zhì)地、土壤溫濕度、抗生素、農(nóng)藥等土壤因素條件下研究綠僵菌孢子在土壤中萌發(fā)情況，結(jié)果表明，不同土壤質(zhì)地下孢子萌發(fā)率差異不明顯;在4個(gè)濕度梯度下黃泥土和黑土對(duì)孢子萌發(fā)的影響不顯著，

7、砂土對(duì)土壤濕度的敏感度較強(qiáng)，不同土壤質(zhì)地最適于孢子萌發(fā)的土壤濕度也不同;供試砂土在溫度為30℃、6％的土壤濕度條件下，孢子萌發(fā)率達(dá)到80％，供試黑壤土在溫度為20℃、濕度為6％或者溫度為30℃濕度為12％條件下孢子萌發(fā)率均達(dá)到60％。覆蓋地土壤中加入卡那霉素孢子的萌發(fā)率達(dá)到62.32％;非覆蓋地土壤中，加入氯霉素的土壤中孢子萌發(fā)率達(dá)到了52.12％，加入青霉素、利福平和鏈霉素的土壤中孢子萌發(fā)率為27.06％左右。添加農(nóng)藥后兩種土壤中孢子