N+離子注入甘草誘導(dǎo)根部基因差異表達(dá)的分析.pdf

1、離子束生物工程自上世紀(jì)80年代提出以來，短短數(shù)十年發(fā)展迅速，在我國已成為對作物、植物、微生物等誘變育種、獲得優(yōu)良性狀的主要誘變方式之一，取得了廣泛的成果。離子束注入技術(shù)相比于其他物理化學(xué)誘變手段來說，具有損傷輕、突變頻率高、突變譜寬的特點，利于篩選和獲得突變種。
　　甘草作為一種價值很高的藥用植株，其代謝產(chǎn)物甘草酸及其他化合物有很高的藥用價值，其次，作為牧區(qū)主要牧草之一，還具有防風(fēng)固沙、為牲畜提供混合牧草原材料的主要作用。甘草相關(guān)

2、的研究近年來日漸增多。離子束誘變育種在甘草的應(yīng)用也有報道，主要集中在離子注入對甘草當(dāng)代抗逆性、酶活、基因多態(tài)性的分析，對于離子注入造成的甘草當(dāng)代基因表達(dá)多態(tài)性的研究尚未見報道。
　　本論文研究了不同劑量N+離子注入甘草對甘草萌發(fā)的影響以及離子注入甘草誘導(dǎo)的當(dāng)代幼根中基因的差異表達(dá)。
　　主要結(jié)論如下:
　　1.采用N+離子注入處理甘草種子，分6個劑量(2.6×1016ions/cm2,3.9×1016ions/cm2,

3、5.2×1016ions/cm2,6.5×1016ions/cm2,7.8×1016ions/cm2,9.1×1016ions/cm2)進(jìn)行處理，測定其發(fā)芽指標(biāo)，發(fā)現(xiàn)發(fā)芽率、發(fā)芽勢、發(fā)芽指數(shù)三個指標(biāo)均隨劑量的升高呈類似“馬鞍形”曲線，各處理組發(fā)芽率均高于對照組，證實了在此劑量范圍內(nèi)N+離子注入對甘草種子的萌發(fā)具有促進(jìn)作用，在注入劑量為2.6×1016ions/cm2時對甘草種子發(fā)芽的促進(jìn)作用最大，并在注入劑量7.8×1016ions/c

4、m2時達(dá)到第二個峰值，發(fā)芽率、發(fā)芽勢和發(fā)芽指數(shù)3個指標(biāo)反應(yīng)的趨勢幾乎相同，且處理間具有顯著性。
　　2.利用cDNA-AFLP分子標(biāo)記技術(shù)N+離子注入甘草種子誘導(dǎo)甘草當(dāng)代幼根中基因差異表達(dá)進(jìn)行了分析。利用反轉(zhuǎn)錄技術(shù)獲得氮離子注入甘草幼根以及未經(jīng)氮離子注入的甘草幼根的cDNA，使用PstI和MseI兩種限制性內(nèi)切酶進(jìn)行雙酶切，設(shè)計接頭與預(yù)擴(kuò)增引物以及對應(yīng)的9對選擴(kuò)引物，進(jìn)行特異片段擴(kuò)增及測序，經(jīng)過分析，9對選擴(kuò)引物共81個引物搭配的